[發明專利]抑制核盤菌的miRNA及其應用

有效

• 申請號: 202110717623.0
• 申請日: 2021-06-28
• 公開（公告）號: CN113528518B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 梅家琴;錢偉;高楊;湯青林
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/84;C12N15/80;C12N1/15;A01H6/82;A01H6/20;C12R1/645
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發明屬于植物分子生物學領域，具體涉及一個抑制核盤菌的Os?miR169y及其應用。Os?miR169y成熟miRNA序列如SEQ ID No.1所示，其人工合成的前體核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本發明的Os?miR169y可靶向核盤菌SsRPL19基因，Os?miR169y在核盤菌中的超量表達顯著抑制了菌絲生長，降低了菌絲致病力，并導致菌核形成時間延后，Os?miR169y在擬南芥中的超量表達，有效減小了發病面積，提高了擬南芥的菌核病抗性，在提高寄主植物菌核病抗性方面具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于植物分子生物學領域，具體涉及一個抑制核盤菌的miRNA及其應用。

背景技術

核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)是一種典型的死體營養型、寄主范圍廣泛的絲狀植物病原真菌，分布范圍覆蓋95個國家及地區，可侵染600多種植物，其中包括一些重要農作物，如大豆，油菜，向日葵，蕓薹屬蔬菜等。在適宜條件下，核盤菌可迅速侵染寄主植物產生菌核病。植物對核盤菌的抗性體現為基礎抗性，目前為止仍未找到核盤菌的致病基因及植物中對應的抗病基因，因此寄主植物的抗菌核病育種進展緩慢。目前生產上主要通過一些農業措施和化學藥劑來防治菌核病，但效果不穩定，并且存在環境污染及抗藥性等問題。開展可抑制核盤菌的生物小分子物質研究，進而指導寄主植物的生產實踐，對實現植物的安全穩產有重要意義。

植物非寄主抗性是自然界廣泛存在的抗病系統，具有持久性和廣譜性，對作物抗病育種有重要的應用價值。對于核盤菌而言，水稻是其非寄主植物之一。根據對水稻與油菜接種核盤菌前和接種后的小RNA測序(sRNA-Seq)及轉錄組測序(RNA-Seq)聯合分析，鑒定到1個水稻特異的、響應核盤菌誘導的miRNA，該miRNA可靶向核盤菌基因。根據其成熟miRNA序列特征，將其歸屬于miR169家族，是該家族一個新成員，本發明將其編號為Os-miR169y。miR169基因家族是植物界所發現的較大的miRNA基因家族，多數成員具有調控植物生長發育及對逆境產生響應的功能。然而Os-miR169y是一個新成員，其功能及靶基因并未有任何報道。本發明對該Os-miR169y進行抑菌功能研究，并開發其用于寄主植物的抗性提高的途徑，可為寄主植物的菌核病抗性改良提供基礎。

發明內容

本發明的目的是提供Os-miR169y成熟miRNA及其應用。

首先，本發明提供Os-miR169y，其為成熟miRNA，序列如SEQ ID No.1所示。

本發明還提供編碼所述的Os-miR169y的前體，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本發明還提供含有所述Os-miR169y的過表達載體，宿主細胞和工程菌。

本發明還提供所述Os-miR169y靶向核盤菌基因并抑制核盤菌的用途。

本發明還提供所述Os-miR169y在調控寄主植物菌核病抗性中的用途。

本發明從水稻中鑒定到了1個與核盤菌抗性相關的Os-miR169y，經雙熒光素酶報告系統檢測，Os-miR169y可靶向核盤菌SsRPL19基因，利用基因工程手段構建了Os-miR169y的核盤菌過表達載體，將其轉入野生型核盤菌中超量表達，能抑制核盤菌的菌絲生長，降低致病力，延緩菌核形成時間。利用基因工程手段構建了Os-miR169y的植物過表達載體，將其轉入野生型擬南芥中超量表達，能有效提高擬南芥菌核病抗性。

本發明為核盤菌寄主植物的抗性改良提供了很好的應用前景。

附圖說明

圖1是Os-miR169y與靶基因SsRPL19堿基結合情況預測結果。