[發明專利]一種萃取劑及其制備方法與應用有效

申請號：	202110716922.2	申請日：	2021-06-28
公開（公告）號：	CN113527459B	公開（公告）日：	2023-07-11
發明（設計）人：	馬菁菁;黃晟鴻;盧傳禮;周光雄	申請（專利權）人：	廣州睿徠醫學診斷技術有限公司
主分類號：	C07K14/47	分類號：	C07K14/47;C07K1/14;G01N1/34;G01N1/40;G01N30/06;G01N33/68
代理公司：	廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205	代理人：	肖云
地址：	510000 廣東省廣州市天河區***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種萃取及其制備方法應用
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【說明書】：

本發明公開了一種萃取劑及其制備方法與應用，所述萃取劑包括A液和B液，所述A液為乙腈；所述B液以水為溶劑，包含銨鹽。本發明的萃取劑只需通過一步操作即可有效降低阿爾茲海默癥檢測樣本中高豐度蛋白的含量，同時不會造成目標成分損失，高豐度蛋白的去除率至少可以達到98％，樣本經過該萃取試劑萃取后，可直接進行LC?MS/MS定量，不需要其它額外操作步驟。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種萃取劑及其制備方法與應用。

背景技術

阿爾茲海默癥(Alzheimer's?disease，AD)是神經系統退行性疾病，伴有特殊病理和生化變化，是一種獲得性、持續性及全面性的認知功能障礙的臨床綜合癥。

相關技術表明，β-淀粉樣蛋白(Aβ)是淀粉樣蛋白前體(APP)經蛋白水解酶作用后的底物，由第21號染色體編碼，是阿爾茲海默癥的主要病理蛋白之一。APP被至少3種酶加工，其切割途徑包括分泌酶途徑I和分泌酶途徑II。在分泌酶途徑中，APP首先被β-分泌酶裂解，隨后在γ-分泌酶作用下，被切割形成含有39-43個氨基酸的多肽。其中，Aβ1-42是最常見的亞型之一，由42-43個氨基酸組成的蛋白質片段，主要位于阿爾茲海默癥患者的腦內。Aβ1-42多肽與阿爾茲海默癥(AD)密切相關，是腦脊液和血漿中的關鍵生物標志物之一。由于臨床樣本(腦脊液)中Aβ1-42多肽的濃度極低，約400pg/mL同時容易發生容易聚集，且存在大量其它高豐度蛋白，嚴重干擾對Aβ1-42多肽的測定，導致對Aβ1-42多肽的檢測難度極高，尚不能很好的應用于AD的臨床診斷和早期篩查。

發明內容

本發明旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出一種萃取劑，能夠用于阿爾茲海默癥臨床樣本前處理，有效降低樣本中高豐度蛋白含量。

本發明還提出一種具有上述萃取劑的應用。

根據本發明的一個方面，提出了一種萃取劑，包括A液和B液，所述A液為乙腈；所述B液以水為溶劑，包含銨鹽。

在本發明的一些實施方式中，所述銨鹽為氟化銨、甲酸銨、乙酸銨和碳酸氫銨中的一種。

在本發明的一些實施方式中，所述B液中銨鹽的含量為1-50mmol/L。

在本發明的一些實施方式中，所述B液中銨鹽的含量為10-30mmol/L。

在本發明的一些實施方式中，所述A液和B液的體積比為40～95：5～60。

本發明的第二方面提出了上述萃取劑的應用，所述萃取劑用于多肽萃取。

在本發明的一些實施方式中，所述萃取劑在制備阿爾茲海默癥檢測試劑中的應用。

在本發明的一些實施方式中，所述萃取劑用于Aβ1-42淀粉樣多肽的萃取。

在本發明的一些實施方式中，所述萃取劑用于阿爾茲海默癥樣本中高豐度蛋白的去除。