[發明專利]一種霍氏糖多孢菌來源的可降解生物胺的含銅胺氧化酶及其應用

有效

• 申請號: 202110710160.5
• 申請日: 2021-06-25
• 公開（公告）號: CN113249350B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 毛健;劉雙平;孫夢菲;徐岳正;周建弟
• 申請（專利權）人: 江南大學;江南大學（紹興）產業技術研究院;浙江古越龍山紹興酒股份有限公司
• 主分類號: C12N9/06
• 分類號: C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;A23L5/20;A23L27/50;C12H1/15;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

本發明公開了一種霍氏糖多孢菌來源的可降解生物胺的含銅胺氧化酶及其應用，屬于分子生物學技術領域。本發明從霍氏糖多孢菌中篩選獲得了1個具有生物胺降解能力的含銅胺氧化酶，該含銅胺氧化酶能夠在24h內降解苯乙胺、組胺、酪胺，降解率分別高達54.27％、57.15％和51.58％，可適用于黃酒、醬油中生物胺的降解，有助于使發酵食品的安全性得到進一步提高。

技術領域

本發明涉及一種霍氏糖多孢菌來源的可降解生物胺的含銅胺氧化酶及其應用，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

生物胺是一種低分子量的含氮有機堿，主要由氨基酸脫羧而形成。生物胺在自然界中分布廣泛，可以由微生物、植物和動物代謝產生，可通過食物攝入人體內。適量的生物胺對人體有積極的作用，如提高人體免疫力、增強血管活性、調節精神活動等。然而，當生物胺大量積聚在人體內時，它們會引起不同的毒性作用，如頭痛、低血壓、心悸和嘔吐等，嚴重時還會危及生命。食品中的生物胺主要來源于食品原料本身和食品加工貯藏過程兩部分，其中水果、蔬菜、谷物等食品原料中含有少量的生物胺，更多的生物胺是在食品加工貯藏中由微生物生長代謝產生的，因此，發酵食品中的生物胺含量普遍偏高，因此，合理控制發酵食品中的生物胺含量具有重要意義。

當發酵食品中已存在生物胺時，接種生物胺降解菌株或運用生物胺降解酶是最有效的方法，此兩種手段具有高效、安全的優點，在控制食品中生物胺含量方面具有巨大的潛力。其中利用生物胺降解酶降解發酵食品中的生物胺的手段對食品的生產工藝、食品風味影響較小。目前的研究表明，胺氧化酶是主要的生物胺降解酶，而目前發現微生物來源的胺氧化酶主要為含黃素的胺氧化酶和含銅的胺氧化酶。含銅胺氧化酶是一類含銅的還原酶，已有學者從多種微生物中分離獲得可降解生物胺的含銅胺氧化酶，對組胺、苯乙胺、酪胺等多種生物胺具有一定的降解能力。

目前分離獲得的具有降解生物胺作用的胺氧化酶種類較少且效果較差，因此，篩選具有高效降解生物胺的胺氧化酶對于降解陳釀黃酒等發酵食品中的生物胺，提升發酵食品的品質具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于解決現有傳統發酵食品中生物胺含量較高的問題，提供一種霍氏糖多孢菌來源的可降解生物胺的含銅胺氧化酶，并用含銅胺氧化酶降解生物胺的方法來降低黃酒、醬油等發酵食品中的生物胺，提升傳統發酵食品的品質。

本發明提供了一種含銅胺氧化酶，為(a)或(b)：

(a)由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(b)在(a)中的氨基酸序列經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且具有含銅胺氧化酶活性的由(a)衍生的蛋白質。

本發明還提供編碼所述含銅胺氧化酶的基因。

在一種實施方式中，所述基因含有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

本發明還提供了攜帶所述基因的重組表達質粒。

在一種實施方式中，所述重組表達質粒為pET系列質粒。

本發明還提供表達所述含銅胺氧化酶的重組微生物細胞。

在一種實施方式中，所述重組微生物細胞包括但不限于大腸桿菌、芽孢桿菌或酵母菌。

本發明還提供一種基因工程菌，以大腸桿菌BL21為宿主，表達SEQ ID NO.2所示的含銅胺氧化酶。

在一種實施方式中,所述基因工程菌以pET系列質粒為表達載體。

在一種實施方式中,所述基因工程菌以pET28a(+)為表達載體，表達SEQ ID NO.2所示的含銅胺氧化酶。

本發明還提供所述基因工程菌的構建方法，是將SEQ ID NO.1所示的基因序列與載體連接，轉化至大腸桿菌細胞中。