[發明專利]一種基因修飾的溶瘤病毒誘導CTL細胞方法及其在腫瘤治療的用途

有效

• 申請號: 202110706975.6
• 申請日: 2021-06-25
• 公開（公告）號: CN113244411B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 亓愛杰;李少波;韋素碧
• 申請（專利權）人: 諾賽聯合（北京）生物醫學科技有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K39/395;A61K35/76;A61K35/761;A61K35/768;A61K38/20;A61P11/02;A61P11/04;A61P35/00
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本發明涉及一種基因修飾的溶瘤病毒誘導CTL細胞方法及其在腫瘤治療的用途。本發明通過制備表達IL?24的溶瘤病毒以及特異性針對PD?1的單克隆抗體。將所述溶瘤病毒與單克隆抗體一起使用可以有效的用于鼻咽癌的治療。通過組合使用可以發現，所述的溶瘤病毒與單克隆抗體一起使用具有協同的治療效果，具有極好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物領域，更具體的，涉及一種基因修飾的溶瘤病毒誘導CTL細胞方法及其在腫瘤治療的用途。

背景技術

溶瘤病毒是一類天然的或經過基因改造的病毒，可以選擇性地感染腫瘤細胞， 在其內大量復制并最終裂解腫瘤細胞，同時會大量釋放腫瘤抗原，改善腫瘤微環境。

溶瘤病毒通過直接的溶瘤作用和誘導機體的免疫活性發揮抗腫瘤作用,由于缺乏在正常細胞中復制的必要條件,溶瘤病毒能靶向性地在腫瘤細胞內復制增殖,最終導致腫瘤細胞裂解和死亡,而對健康細胞無影響。因此,溶瘤病毒具有良好的安全性,同時,具有可長效表達抗腫瘤的外源基因的優點。目前常見的溶瘤病毒包括Ad、單純皰疹病毒1型(herpessimplexvirustype-1,HSV-1)、水泡性口炎病毒(vesicularstomatitisvirus,VSV)、新城疫病毒(newcastlediseasevirus,NDV)、麻疹病毒(measlesvirus)、脊髓灰質炎病毒(poliovirus)、細小病毒(parvoviridae)、呼腸孤病毒(reoviruses)和VV等。

已有研究表明，瘤細胞本身缺乏共刺激分子等多種因素嚴重影響瘤抗原特異性CTL的誘導產生以及相應的殺傷活性。通過在溶瘤病毒基因組中插入具有表達腫瘤殺傷活性產物的基因，如免疫激活基因、藥物前體轉化酶基因、抗腫瘤血管生成基因、凋亡誘導基因等，溶瘤病毒可以直接充當目的基因的運載工具，使目的基因在腫瘤細胞內隨病毒的復制而持續表達，進一步增強溶瘤病毒的殺傷活性。

在溶瘤病毒基因組中插入表達免疫炎性介質的基因，使腫瘤微環境中局部免疫炎性介質異常增高，從而激活機體抗腫瘤免疫反應，增強溶瘤病毒的抗腫瘤效應。目前已有多種免疫激活基因應用于溶瘤病毒的基因重組，如粒-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素(IL-2、IL-12、IL-15、IL-18)、干擾素(IFN-α、IFN-β)等。也有研究設計出能同時表達IL-12和IL-18的重組腺病毒RdB／IL-12／IL-18，IL-12通過激活NK細胞與細胞毒性T細胞激發機體抗腫瘤免疫反應，IL-18則能增強NK細胞毒性作用與促進T細胞分化。在小鼠黑素瘤移植動物模型中，經RdB／IL-12／IL-18局部注射后的瘤體內檢測到IL-12、IL-18、IFN-γ、GM—CSF濃度明顯升高，并且在腫瘤組織切片中，觀察到大量NK細胞、CIM和CD8T細胞浸潤以及腫瘤組織的廣泛壞死，進一步證明了IL-12和IL-18聯合作用對于腫瘤細胞的強大的殺傷活性。同樣的結果也在小鼠結腸癌動物模型中得到驗證，與對照組相比，表達GM-CSF的基因重組麻疹病毒MV—GMCSF能夠顯著延緩小鼠結腸癌的進展并延長小鼠中位生存期。

近年來，溶瘤病毒相關研究取得了巨大進展，引起了廣泛關注。但是嚴格來說，上市并獲得認可的產品只有一款2015年FDA批準的安進公司的T-vec（Imlygic），用于黑色素瘤患者的局部治療，是首個獲得FDA批準的溶瘤病毒治療藥物。2016年又分別在歐洲和加拿大獲批上市。在國內， 2005年CFDA批準了三維生物的安柯瑞（H101）上市，但由于 當時國內臨床試驗標準不完善、審批政策較為寬松以及產品專利之爭等多方面因素的疊加， 這款產品臨床療效至今還未得到國際認可。此外，國內目前有多家公司正在進行溶瘤病毒的開發，并取得了較大的進展，2020年就有多家公司向藥監局提交了溶瘤病毒的臨床申請。而同時腫瘤免疫療法逐漸在向聯合療法傾斜，而臨床證據表明，溶瘤病毒可以加強腫瘤對免疫調節檢查點抑制劑、CAR-T細胞等免疫治療方法的反應率，是聯合治療策略中的理想對象。 使得溶瘤病毒成為腫瘤免疫研究中的熱門方向。

但是目前，在國內提供的溶瘤病毒產品特別是修飾的溶瘤病毒產品與免疫檢查點抑制劑聯合使用的方案也比較少。

發明內容