[發明專利]7種耐藥基因多重PCR檢測的引物、探針及其試劑盒

在審

• 申請號: 202110705983.9
• 申請日: 2021-06-24
• 公開（公告）號: CN113584191A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 宋小慧;夏江
• 申請（專利權）人: 領航基因科技（杭州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 王歡

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其涉及7種耐藥基因多重PCR檢測的引物、探針及其試劑盒。本發明可快速、準確及超高靈敏度地對耐碳青霉烯類藥物的腸桿菌科細菌中碳青霉烯酶基因KPC、NDM、IMP、VIM、OXA48基因，耐甲氧西林的葡萄球菌mecA基因和耐萬古霉素的多重耐藥的腸球菌中vanA基因進行聯合檢測，可實時、快速監測血流感染患者體內的特定耐藥基因的變化，及時評估患者狀況，為臨床醫生提供輔助治療建議。本發明試劑盒亦可用于危重癥患者和免疫抑制人群無癥狀定植者的CRE、MRSA和VRE中7種細菌耐藥基因的主動篩查，在科研領域和臨床上具有極高的應用價值。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其涉及7種耐藥基因多重PCR檢測的引 物、探針及其試劑盒。

背景技術

抗菌藥物是臨床應用最廣泛的一類藥物，但近年感染性疾病的病死率迅 速提升，究其原因在于抗生素濫用，耐藥菌帶來的用藥困難。我國是抗生素 濫用情況最為嚴重的國家之一，然而隨著抗生素使用量的增加，細菌耐藥情 況也越發嚴重。當前，細菌耐藥性的監測/檢測重點包括：1、耐碳青霉烯類藥 物的腸桿菌科細菌(CRE)；2、耐甲氧西林的葡萄球菌(MRSA)；3、耐萬古 霉素的多重耐藥的腸球菌(VRE)。

碳青霉烯類抗生素對大多數革蘭氏陽性及革蘭氏陰性病菌感染均有強大 的抗菌效果，是臨床上抵御嚴重細菌感染的重要屏障。但是隨著碳青霉烯類 抗菌藥物的大量使用，國內外開始報道對碳青霉烯類抗菌藥物不敏感甚至耐 藥的腸桿菌科細菌，這極大地限制了碳青霉烯類抗菌藥物的使用。革蘭氏陰 性菌對碳青霉烯耐藥最主要的機制是產生碳青霉烯酶，按照Ambler分子分類 方法，碳青霉烯酶可分為A、B和D三類，A類以blaKPC為主，B類為金屬 β-內酰胺酶，以blaNDM、blaIMP和blaVIM為主，D類為OXA-48型絲氨酸 碳青霉烯酶。我國臨床分離的CRE菌株產生碳青霉烯酶以KPC和NDM型為 主，少數菌株產生OXA-48、IMP和VIM型碳青霉烯酶。編碼碳青霉烯酶基 因由質粒介導，細菌一般產單一碳青霉烯酶，少數細菌會產碳青霉烯酶復合 酶。CHINET中國細菌耐藥監測網對2018年收集自全國39所醫院935株CRE 菌株的研究結果顯示，產KPC、NDM和OXA-48型碳青霉烯酶菌株所占比例 分別為51.6％(482/935)、35.7％(334/935)和7.3％(68/935)。頭孢他啶/阿 維巴坦，對于產KPC-2腸桿菌科細菌感染有良好的效果，但對于金屬酶無效。

在過去的10多年里，革蘭氏陽性球菌感染所占比例逐漸增加，同時革蘭 氏陽性球菌對臨床常用抗菌藥物耐藥性日益嚴重，其中耐甲氧西林葡萄球菌 (MRSA)、耐萬古霉素腸球菌(VRE)在臨床上分離率高，所致感染治療困 難，是當前最受關注的耐藥革蘭氏陽性球菌。青霉素結合蛋白(Penicillin-bindingprotein 2a,PBP2a)是MRSA耐藥性產生的主要原因， 這種蛋白質對β-內酰胺類抗菌藥物的親和力很低，而mecA基因是調節編碼 PBP2a最關鍵的基因，mecA基因主要存在于金黃色葡萄球菌染色體mec 基因盒上。耐萬古霉素腸球菌(VRE)的耐藥機制主要是由于腸球菌獲得了 vanA、vanB、vanC、vanD、vanE等耐藥基因后，細胞壁的生物合成途徑發生 了改變，使其合成的肽聚糖前體與萬古霉素等糖肽類抗生素親和力下降，從 而導致腸球菌對萬古霉素耐藥，通常以vanA、vanB兩型較為多見，故最具臨床意義。