[發明專利]一種陰道上皮細胞培養基及其應用

在審

• 申請號: 202110705724.6
• 申請日: 2021-06-24
• 公開（公告）號: CN113528428A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 趙光鋒;胡婭莉;戴建武
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院;中國科學院遺傳與發育生物學研究所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

本發明公開了一種陰道上皮細胞培養基及其應用。一種陰道上皮細胞培養基，除基礎培養基外還包含以下組分：還包括EGF 4?6ng/ml和bFGF 5?7ng/ml。所述的基礎培養基為DMEM?F12基礎培養基加Nutridoma 0.2?1mg/ml，青鏈霉素雙抗100單位/ml，丙酮酸5?20mg/L，L?谷氨酰胺3?6mg/ml。本發明培養基可顯著促進原代陰道上皮細胞的貼壁及克隆生長。在傳代后，本發明培養基能夠維持陰道上皮細胞的細胞特征和干性，并促進其增殖，抑制其凋亡。

技術領域

本發明屬于細胞培養技術領域,涉及一種陰道上皮細胞培養基及其應用。

背景技術

先天性無陰道或陰道發育不全、盆腔廓清術后陰道缺如或狹窄等患者常需要陰道重建。重建陰道需要功能細胞，而其中最主要的為陰道上皮細胞。但是，陰道上皮細胞屬于鱗狀上皮細胞，為終末端分化細胞，存在傳代、擴增困難的問題。一般來說，分離的原代上皮細胞第一代容易生長，但從第二代開始，很難用傳統培養基進行傳代擴增，容易出現分化、衰老甚至死亡的情況。雖然對于其它器官上皮細胞的培養和擴增已有所報道，但是這些器官的上皮細胞一般為非復層鱗狀上皮細胞，而且這些器官上皮細胞的生長環境與陰道上皮細胞完全不同，因此培養這些器官上皮細胞的培養基不能直接用來進行陰道上皮細胞的培養。至今，對于陰道上皮細胞的培養，尤其是用于促進陰道上皮細胞擴增、傳代的培養基尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于人陰道上皮細胞培養、擴增的培養基。而用本培養基培養的陰道上皮細胞可用于陰道重建。

本發明的目的可通過以下技術方案實現：

一種陰道上皮細胞培養基，除基礎培養基外還包含以下組分：還包括EGF 4-6ng/ml和bFGF 5-7ng/ml。

作為本發明的一種優選，所述的基礎培養基為DMEM-F12基礎培養基加Nutridoma0.2-1mg/ml，青鏈霉素雙抗100單位/ml，丙酮酸5-20mg/L，L-谷氨酰胺3-6mg/ml。

作為本發明的進一步優選，所述的陰道上皮細胞培養基還包含wnt3α3-5ng/ml、R-spondin1 5-8ng/ml、Noggin 5-6ng/ml、FGF10 4-5ng/ml。

作為本發明的更進一步優選，所述的陰道上皮細胞培養基還包含wnt3α5ng/ml、R-spondin1 5ng/ml、Noggin 5ng/ml、FGF10 5ng/ml。

一種陰道上皮細胞培養方法，用本發明所述的培養基進行培養。

作為本發明的一種優選，培養條件為：分離獲取原代陰道上皮細胞后，鋪于培養板中，然后加入適量上述陰道培養基。在細胞融合度達到80％左右后，繼續用此培養基進行傳代擴增。

有益效果：

本發明培養基可顯著促進原代陰道上皮細胞的貼壁及克隆生長。在傳代后，本發明培養基能夠維持陰道上皮細胞的細胞特征和干性，并促進其增殖，抑制其凋亡。

附圖說明

圖1不同配方培養基培養人陰道上皮細胞情況(P1-P3代)。

圖2三種培養基培養人陰道上皮細胞轉錄組分析。

A：2^#、3^#及4^#培養基培養的人原代陰道上皮細胞(P0)及培養1代(P1)的細胞轉錄組測序分析。

B：P1代陰道上皮細胞在2^#、3^#及4^#培養基培養條件下上皮、干性、增殖、衰老、自噬等基因的heatmap圖。

具體實施方式