[發明專利]一種表達埃博拉GP蛋白的重組病毒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110704819.6
• 申請日: 2021-06-24
• 公開（公告）號: CN113416714A
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 步志高;王翀;溫志遠;葛金英;王喜軍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所（中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心）
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/85;C12N15/66;C12N15/40;A61K39/12;A61P31/14;C07K16/10;C07K16/06;G01N33/569;C12R1/93
• 代理公司: 北京象合知識產權代理事務所(普通合伙) 11893
• 代理人: 封明艷;鄭慧娟

本發明屬于生物工程技術領域。具體涉及一種表達埃博拉GP蛋白的重組病毒、該重組病毒的構建、制備方法及其在抗埃博拉病毒中的應用。所述的重組病毒為可以表達埃博拉GP蛋白的重組水泡型口炎病毒rVSVΔG?Makona?GP；該病毒含有Makona GP蛋白基因的重組全基因組克隆質粒pCI?RzVSVΔG?Makona?GP。本發明的優點：(1)重組病毒易于增殖、致病性極低、無基因漂移風險、安全性更高。(2)重組病毒的構建方法簡單，易行，易于大規模生產。(3)重組病毒對EBOV具有交叉保護能力。(4)疫苗一次免疫食蟹猴就可以快速激發體液免疫反應，產生特異性EBOV中和抗體。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域。具體涉及一種表達埃博拉GP蛋白的重組病毒、該重組病毒的構建、制備方法及其在抗埃博拉病毒中的應用。

背景技術

埃博拉病毒病(Ebola virus disease，EVD)是由埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)感染引起的急性，發熱并伴有嚴重出血癥狀的烈性人獸共患病。EBOV是致死率最高的病原之一，感染后致死率最高可達90％。自1976年EHF在扎伊爾東北部和蘇丹南部暴發以來，至今發生過多次疫情。至今已發現并分離多種抗原型的EBOV，分別為扎伊爾型(Zaire Ebolavirus,ZEBOV)，蘇丹型(Sudan ebola virus,SEBOV)，萊斯頓型(Reston ebola virus,REBOV)，本迪布焦型(Bundigbugyo ebola virus,BEBOV)和塔伊森林型(Forest ebolavirus，TAFV)，而其中ZEBOV爆發次數最多、致死率最高。EVD病程短，感染1～4天就會死亡。

EBOV屬于絲狀病毒科(Filoviridae)，EBOV屬，具有囊膜，基因組為不分節段的單股負鏈RNA病毒。EBOV的基因組編碼7種結構蛋白，從3’端到5’端依次為核蛋白(NP)，VP35，VP40，糖蛋白(GP)，VP30，VP24以及RNA依賴的RNA聚合酶蛋白(L)，此外，EBOV還編碼兩種非結構蛋白：sGP和ssGP。EBOV的GP蛋白是病毒粒子表面唯一的跨膜蛋白，通過與宿主細胞表面的受體結合介導病毒與宿主細胞融合，使病毒吸附并進入細胞。成熟的GP蛋白以三聚體的形式呈現在病毒粒子表面，是誘導產生中和抗體的最關鍵蛋白，是保護動物免受病毒感染的最關鍵的免疫原性蛋白。

2014年在西非出現的疫情是繼1976年首次發現EBOV以來發生的最嚴重且最復雜的EBOV疫情。此次疫情爆發流行的EBOV屬于ZEBOV，但其為一個新變種，其GP蛋白與1976年的ZEBOV株相比，氨基酸同源性為97.6％。2014年西非流行株的抗原性與之前相比發生了一定的變化。研制能夠快速激發免疫應答的疫苗對于緊急免疫、挽救病人生命，非常重要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種表達埃博拉GP蛋白的重組病毒和該重組病毒的構建方法，方法簡單，易行，易于大規模生產。本發明還提供了該重組病毒的應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種表達埃博拉GP蛋白的重組病毒，所述的重組病毒為可以表達埃博拉GP蛋白的重組水泡型口炎病毒rVSVΔG-Makona-GP；

該病毒含有Makona GP蛋白基因的重組全基因組克隆質粒pCI-RzVSVΔG-Makona-GP。

進一步的，所述的Makona GP蛋白基因序列為合成基因序列，其以EBOV西非流行株Makona株(GeneBank:KP178538.1)的GP的基因序列按照哺乳動物密碼子偏噬性對GP蛋白進行人工密碼子優化并合成，并在在起始密碼ATG前分別引入VSV基因起始、終止及Kozak序列；其3’→5’的順序為：

TATGAAAAAAACTAACAGATATCACGACGCGTACAACC。

本發明還提供一種表達埃博拉GP蛋白的重組病毒的制備方法。