[發明專利]用于純化分離病毒類抗原的液相色譜法

有效

• 申請號: 202110704351.0
• 申請日: 2021-06-24
• 公開（公告）號: CN113416235B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發明（設計）人: 毛慧明;許峰;楊克;胡新妹;黃學英
• 申請（專利權）人: 蘇州賽分科技股份有限公司
• 主分類號: C07K14/005
• 分類號: C07K14/005;C07K1/16;C12N7/02;B01D15/38;B01D15/36;B01D15/20;C12R1/93;C12R1/92
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 高一平;徐迅

本發明公開了一種新型復合型層析介質，其具有獨特的核殼結構，專為生物大分子的分離純化而設計。其以高聚物微球為基質，粒徑均一，粒徑大小可以調節并精確控制，具有良好的物理化學穩定性。其表面經特殊處理，具有更好的親水性，最大程度地避免了與生物類樣品的非特異性吸附。并通過專有的表面修飾專利技術，通過精確控制兩步關鍵的化學反應來建立殼層、核層的表面化學。兩層的表面化學官能團可以選擇和官能團密度可以調節、精確控制，并確保了殼層、核層的官能團的高密度和均一性，殼層、核層的厚度可以調節且均一性良好。該核殼結構復合模式層析介質可廣泛適用于蛋白、抗體、病毒、病毒載體、疫苗、DNA、RNA、質粒等生物大分子的分離和純化。

技術領域

本發明涉及復合模式層析介質液相色譜純化分離應用領域。具體而言，本專利涉及一種化學合成的多孔親水高分子微球，其具有獨特的殼核結構，以及其在病毒、病毒載體、病毒樣顆粒純化分離的液相色譜應用。

背景技術

液相色譜(Liquid?Chromatography，LC)是從混合物中分離物質的重要工具。作為現代液相色譜的關鍵組成部分，液相色譜層析介質，多為固體多孔載體，可分為兩大類：無機液相色譜層析介質(二氧化硅和相關無機氧化物)和有機液相色譜層析介質。而有機液相色譜層析介質可以進一步分為天然聚合物，如瓊脂糖、纖維素、葡聚糖、殼聚糖及其衍生物，以及合成聚合物。

液相色譜在化學、生物化學、制藥等前沿科學領域發揮著越來越重要的作用，越來越受到學術界和工業界的關注。一般來說，液相色譜在所有的制藥過程中，包括發現、開發、制造過程和質量控制，都涉及并發揮著非常重要的作用。例如，它被廣泛用于鑒定和分析樣品中是否存在化學物質或微量元素，制備大量極純材料，分離手性化合物，檢測混合物和未知化合物的純度，以及大規模分離和純化藥物。

生物制品(biologics)作為新的重要治療劑出現，涵蓋了廣泛的產品，如各種重組治療蛋白、疫苗、血液和血液成分、過敏原、細胞、基因治療和組織。生物制品通常由糖類、蛋白質，核酸或它們的復雜組合組成，其來源可以是天然的，如從人類、動物或微生物中分離出來，或通過生物技術方法和其他尖端技術生產制備。它們通常處于生物醫學研究的最前沿，可用于治療各種其他方法難以治療的嚴重疾病。

然而，由于生物藥物的物理化學特性的異質性和其分離復雜性，因此其在生物藥物的發現、開發和制造中存在許多挑戰和未解決的問題。例如，1)它們的分子量(MW)、電荷和過渡期后修飾不同，因此先進的液相色譜表征和快速質量控制(QC)分析技術必不可少。2)可能與產品有關或與工藝有關的雜質，必須被去除和表征，因此生物醫藥的制備通常需要多個大規模和高純度的純化過程。3)由于其穩定性差和濃度低，必須優化下游純化工藝，其目的是提高生產效率，降低生物制品的藥物成本。例如，減少或簡化LC工藝步驟、提高純化速度、減少緩沖液的消耗和廢物產生，都可以幫助提高生物醫藥的生產效率和降低其生產成本。

眾所周知，生物制品的分離純化主要依靠色譜技術。上述這些未滿足且具有挑戰性的需求為新液相色譜層析介質的開發提供了機會。隨著研發和商業化管線中治療性生物制品的數量不斷增加，其結構的復雜性也在增加，對分析和分離的要求也相應增加。

雖然新液相色譜層析介質不時出現，但它們總體上跟不上生物制藥行業的高要求，原因有以下幾點：1)生物制藥行業需要液相色譜平臺產品，在下游純化工藝(DSP)方面能夠為新的生物制品提供系統化和平臺化的解決方案，而不是為每個新的生物制品進行新的、通常是漫長的工藝開發。2)在生物藥物的不同商業化階段，所選擇的液相色譜層析介質缺乏可擴展性。從分析表征到生產，從小規模到大規模生產，這都是有問題的，而許多液相色譜介質在商業上只提供一定范圍的微球大小和孔徑大小，而且樹脂化學的選擇也很有限。即使最初的分析結果或小規模純化結果很好，也不能保證商業化的液相色譜層析介質可以用于全面生產。3)缺乏通用的樹脂化學或分離模式來滿足個別的分離和純化的挑戰。工業界不僅需要一些具有常規性能的液相色譜層析介質以保持其低成本，而且還需要定制的液相色譜層析介質(或可以易于定制的液相色譜層析介質)以提高制造效率。

發明內容