[發明專利]ETV4基因在重編程增生性瘢痕成纖維細胞中的應用

在審

• 申請號: 202110702862.9
• 申請日: 2021-06-24
• 公開（公告）號: CN113403283A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 代強;于倩;蔡磊;肖苒
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院整形外科醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/12;C12N15/867
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 姚曉麗

本發明公開了ETV4基因在重編程增生性瘢痕成纖維細胞中的應用，屬于醫藥技術領域。本發明經過研究發現，ETV4基因可以用于重編程增生性瘢痕成纖維細胞，既開拓了ETV4基因新的應用領域，也開拓了新的重編程增生性瘢痕成纖維細胞的基因，具有積極的藥學價值和廣泛的社會意義。

技術領域

本發明涉及ETV4基因在重編程增生性瘢痕成纖維細胞中的應用，屬于醫藥技術領域。

背景技術

增生性瘢痕成纖維細胞(Hypertrophic scar fibroblasts，簡稱HSF)在創面愈合過程中被過度激活，產生大量的細胞外基質，使其在細胞外過度沉積，是導致增生性瘢痕形成的重要原因。在增生期瘢痕中，成纖維細胞合成和分泌膠原能力增強，特別是Ⅰ、Ⅲ型膠原的含量遠遠高于正常皮膚。應用細胞生物學技術使瘢痕肌成纖維細胞逆轉為成纖維細胞或轉化為其它細胞，減少Ⅰ、Ⅲ型膠原產生，重塑細胞外基質，為瘢痕的治療開辟了新方向。如何調控瘢痕成纖維細胞表型改變是目前瘢痕治療的研究熱點。

ETV4(英文全稱為ETS translocation variant 4)基因，屬于ETS(E26translocation-specific)轉錄因子家族，又叫做PEA3或E1AF。目前，ETV4基因相關的研究主要集中在其與腫瘤局部侵襲和遠處轉移之間的關系，例如：在一種低轉移性的乳腺癌細胞MCF7中過表達ETV4，則會導致其侵襲性增加；而在腫瘤細胞中敲低ETV4的表達，則會導致腫瘤侵襲性降低。但是，ETV4基因與增生性瘢痕成纖維細胞之間的關聯性，目前并沒有相關報道。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供ETV4基因在重編程增生性瘢痕成纖維細胞中的應用。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：ETV4基因在重編程增生性瘢痕成纖維細胞中的應用。

本發明的原理是：

本發明分別檢測增生性瘢痕成纖維細胞及正常真皮成纖維細胞中mRNA表達水平，發現增生性瘢痕成纖維細胞中ETV4表達明顯低于正常真皮成纖維細胞。通過構建ETV4過表達慢病毒載體，轉染人增生性瘢痕成纖維細胞，使其Ⅰ、Ⅲ型膠原表達明顯下調，在體外實現改善瘢痕的作用。因此，ETV4基因可以用于重編程增生性瘢痕成纖維細胞，既開拓了ETV4基因新的應用領域，也開拓了新的重編程增生性瘢痕成纖維細胞的基因，具有積極的藥學價值和廣泛的社會意義。

本發明的有益效果是：

本發明經過研究發現，ETV4基因可以用于重編程增生性瘢痕成纖維細胞，既開拓了ETV4基因新的應用領域，也開拓了新的重編程增生性瘢痕成纖維細胞的基因，具有積極的藥學價值和廣泛的社會意義。

在上述技術方案的基礎上，本發明還可以做如下改進。

進一步，所述重編程增生性瘢痕成纖維細胞的方法是：

步驟1：取新鮮的人增生性瘢痕標本，進行組織消化，分離獲取增生性瘢痕成纖維細胞；

步驟2：將如SEQ ID No.1所示的人ETV4基因CDS區編碼序列連接至pCDH質粒載體上，獲取pCDH-ETV4過表達質粒并進行擴增；

步驟3：將目的基因ETV4質粒、包裝質粒psPAX2和包膜質粒pMD2.G共轉染HEK 293T細胞，收集病毒上清，濃縮后，獲得慢病毒懸液；

步驟4：取步驟1的增生性瘢痕成纖維細胞，培養傳至第3代，得到P3代增生性瘢痕成纖維細胞，待細胞融合至70％-80％，用步驟3的慢病毒懸液進行感染，72h后，即得到經過ETV4基因重編程的增生性瘢痕成纖維細胞。

采用上述進一步的有益效果是：通過上述操作，可以獲得過表達ETV4基因的增生性瘢痕成纖維細胞。