[發明專利]一種西藏環狀病毒、版納病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可視化檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202110701784.0
• 申請日: 2021-06-23
• 公開（公告）號: CN113462816B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 楊振興;廖德芳;李占鴻;李卓然;楊恒
• 申請（專利權）人: 云南省畜牧獸醫科學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊;于洪

1.一種西藏環狀病毒、版納病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可視化檢測試劑盒，其特征在于，包括引物組、顯色物質、陽性對照和陰性對照；

所述引物組包括用于檢測TIBOV的特異性RT-LAMP引物組、用于檢測BAV的特異性RT-LAMP引物組和用于檢測MSV的特異性RT-LAMP引物組；

其中，用于檢測TIBOV的特異性RT-LAMP引物組，包括以下6條引物：

TIBOV-F3：5’-gaggataaacctacagaggaa-3’（SEQ ID NO.1）；

TIBOV-B3：5’-tctccttttctttcttgacatt-3’（SEQ ID NO.2）；

TIBOV-FIP：5’-ttctcctttttctgtttgctctcttgggaaagagaaacagattggt-3’（SEQ IDNO.3）；

TIBOV-BIP：5’-gaagattcggtggtggaaaaagattgattaggtttagcgtgct-3’（SEQ ID NO.4）；

TIBOV-Floop：5’-ccttccgctcttcatctacctc-3’（SEQ ID NO.5）；

TIBOV-Bloop：5’-ggtacgtgcggcgaaagca-3’（SEQ ID NO.6）；

用于檢測BAV的特異性RT-LAMP引物組，包括以下5條引物：

BAV-F3：5’-acataatttcgctaggagtcaa-3’（SEQ ID NO.7）；

BAV-B3：5’-gtccattctcttttaaatcgttac-3’（SEQ ID NO.8）；

BAV-FIP：5’-attacgaagcgtgggtcgtggcttgccgcttaactttg-3’（SEQ ID NO.9）；

BAV-BIP：5’-acttcttgatttccagcatcagtcacaaatcttttgtattgctcg-3’（SEQ IDNO.10）；

BAV-Floop：5’-accctcacaacccacagttt-3’（SEQ ID NO.11）；

用于檢測MSV的特異性RT-LAMP引物組，包括以下5條引物：

MSV-F3：5’-agatggaagaaatgccaact-3’（SEQ ID NO.12）；

MSV-B3：5’-aactcacgttttaaatcgtttg-3’（SEQ ID NO.13）；

MSV-FIP：5’-acatttcaccacttcgtttgtcaataagcgtatttacccggttc-3’（SEQ ID NO.14）；

MSV-BIP：5’-agtgttgacagatgaaatgatggatggtatcttggcgacagt-3’（SEQ ID NO.15）；

MSV-Floop：5’-atgatcagcaggtgctgttg-3’（SEQ ID NO.16）。

2.根據權利要求1所述的西藏環狀病毒、版納病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可視化檢測試劑盒，其特征在于，所述顯色物質為鈣黃綠素和氯化錳。

3.根據權利要求1所述的西藏環狀病毒、版納病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可視化檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為TIBOV、BAV和MSV的重組質粒；陰性對照為DEPC處理ddH₂O。

4.根據權利要求3所述的西藏環狀病毒、版納病毒和芒市病毒的快速一步法RT-LAMP可視化檢測試劑盒，其特征在于，TIBOV、BAV和MSV的重組質粒制備方法為：利用TIBOV的SEQID NO.1和SEQ ID NO.2引物、BAV的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8引物、MSV的SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13引物，分別對TIBOV、BAV和MSV的RNA進行RT-PCR，將擴增產物與pMD18-T連接構建獲得TIBOV、BAV和MSV的重組質粒TIBOV-CPMD、BAV-CPMD和MSV-CPMD。