[發明專利]一種裝載細胞的方法

在審

• 申請號: 202110700933.1
• 申請日: 2021-06-21
• 公開（公告）號: CN113755479A
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 杜明春;張貴士
• 申請（專利權）人: 深圳鈞興生物科技有限公司
• 主分類號: C12N11/02
• 分類號: C12N11/02;C12N5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及生物技術領域，具體的，涉及一種裝載細胞的方法。本發明中，在低溫下生物大分子材料與細胞可以均勻混合；在高溫下生物大分子材料可以快速形成穩定的水凝膠結構，實現裝載細胞的功效。本發明步驟簡潔，材料與細胞直接混合后通過升溫的方式即可裝載細胞；本發明對細胞影響極小，裝載過程中無有害物質（如交聯劑）添加，裝載時間短，控制在15分鐘以內，溫度變化不影響細胞正常生長，細胞活率可達90%以上；本發明可達到材料三維包裹細胞的效果，形成的水凝膠結構具有一定的力學強度，可模擬細胞體內三維生長微環境。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種裝載細胞的方法，該方法可以方便快捷裝載細胞，細胞活率可達90％以上。

背景技術

細胞裝載技術可以使細胞能夠在載體的三維立體空間結構中遷移、生長，構成三維的細胞/載體復合物，在癌癥研究、干細胞研究、藥物研發、再生醫學等前沿熱點領域應用潛力巨大。

現有裝載細胞的方法可分為如下兩種：一種是將細胞分散在生物材料中，然后通過材料交聯實現細胞裝載；另外一種是將細胞“播種”在生物材料上，通過細胞與材料結合實現細胞裝載。

CN109810267A“一種可實現細胞三維裝載的絲素蛋白/透明質酸雙網絡水凝膠的制備方法”屬于第一種方法，其中，通過向絲素蛋白溶液和改性透明質酸溶液形成的預聚物溶液中加入光引發劑，然后經超聲處理與細胞混合，在紫外光下進行光交聯成膠實現細胞在高強、高韌的雙網絡水凝膠中的裝載。然而該方法過程復雜，光引發劑有細胞毒性，紫外光照射也會損傷細胞。

CN102286422B“一種用于體外細胞共培養的復合微囊模型”，其中，通過將材料與細胞混合，然后滴入多價陽離子溶液中交聯成膠實現裝載細胞。該方法雖然操作簡便，但交聯過程反應強烈，多價陽離子濃度過高，對細胞活性影響較大。

Snippert H J使用Matrigel與細胞混合，Matrigel在10℃以上即可成膠裝載細胞。但操作過程中需要保持Matrigel一直置于冰上，所有接觸Matrigel的細胞培養器皿、移液吸頭、分裝管等都必須經過預冷處理。該方法操作比較復雜，耗時較長，而且形成的水凝膠結構力學強度很低，基本呈無定形狀態。Snippert H J.Single Lgr5 stem cells buildcrypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.Nature,2009,459,262-265.

CN109593704A“一種三維微載體細胞吸附培養的方法”屬于第二種方法，其中，將細胞懸液與干燥的三維微載體混合，然后采用旋轉動態吸附方法孵育，使細胞粘附于所述三維微載體上實現裝載細胞。該方法操作比較復雜，耗時較長，材料并非三維包裹細胞，只能形成仿生的三維立體生長模式。

針對以上裝載細胞方法中的問題，本發明采用低溫下材料與細胞直接混合，高溫下快速成膠的方式裝載細胞，操作過程方便快捷，15分鐘以內即可完成；過程中無有害物質(如交聯劑)添加，溫度變化不影響細胞正常生長，細胞活率可達90％以上；裝載的細胞在材料三維包裹中，而且具有一定的力學強度，可模擬細胞體內三維生長微環境。

發明內容

本發明提供一種裝載細胞的方法。

一種裝載細胞的方法，其中，依次包括如下步驟：

(1)在低溫條件下，將生物大分子材料與細胞直接混合，反復吹打細胞，直至細胞與材料混合均勻；

(2)將材料/細胞混合物置于高溫條件下，形成水凝膠結構封裝細胞。

本發明一種裝載細胞的方法，其中，所述步驟(1)中低溫條件范圍為-5–15℃。

本發明一種裝載細胞的方法，其中，所述步驟(1)中低溫條件范圍為0–4℃。