[發(fā)明專利]一種精準識別且穩(wěn)定的真菌熒光染色液

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• 申請日: 2021-06-23
• 公開（公告）號: CN113504091A
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權）人: 廣州翰德澤信醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種操作簡便，染色效果好，上皮細胞黃綠色與真菌藍白色色差明顯，檢出率高且體系穩(wěn)定易于保存的真菌熒光染色液。真菌熒光染色液中的熒光素可以高親和力地與真菌細胞壁上的β?多糖，如幾丁質與纖維素等結合，從而標記樣品中存在的真菌成分，并在熒光顯微鏡下可以清楚地觀察到真菌形態(tài)。該染色液添加了防干擾熒光助劑，可提高熒光染料與真菌細胞壁的結合率，另在紫外激發(fā)下，熒光強度增強，使得真菌菌絲與孢子等繁殖體發(fā)出明亮的藍白熒光，在熒光顯微鏡觀察下，真菌輪廓清晰可見同時提高染色液組分體系的穩(wěn)定性，降低染液熒光淬滅風險；且此染色液一步染色，數秒上色，操作簡單，節(jié)約檢測時間，上皮細胞等組織被染為黃綠色，與藍白色的真菌色差明顯，同時還可提高真菌檢出率。

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)學診斷技術領域，具體涉及一種精準識別且穩(wěn)定的真菌熒光染色液。

技術背景

真菌屬于真核生物，沒有質體，營養(yǎng)方式為吸收，無吞噬作用，可引起人類，動物的疾病，稱為真菌??；還可引起植物的疾病、人類過敏性疾病和真菌毒素中毒癥。目前已發(fā)現真菌約有上萬種，其中有大約270多種對人類具有致病性。真菌侵犯人體常繼發(fā)于其他疾患，如惡性腫瘤、糖尿病等慢性消耗性疾?。淮髣┝縓線照射、免疫抑制劑等導致免疫功能和抵抗力低下患者容易感染真菌；大量應用腎上腺皮質激素的病人，其炎癥反應多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、導管插管、放療等應用引起局部組織損傷，為真菌的入侵提供了條件。近年來由于免疫缺陷病毒感染者的不斷出現，使原來不致病的真菌轉為致病真菌。因此，真菌感染已經成為一個日益嚴峻的問題。

真菌分為淺部真菌和深部真菌。

淺部真菌：主要侵犯機體皮膚，寄生和腐生于表皮，毛發(fā)和指甲板的角質組織中，引起淺部真菌病，簡稱癬病。臨床最多見的淺部真菌病有：體癬、股癬、手癬和足癬。

深部真菌：指侵犯表皮以外組織和器官的病原菌和條件致病真菌，常見的有：念珠菌，隱球菌，組織胞漿菌，馬爾尼菲青霉菌，曲霉，毛霉菌，孢子菌絲等。

目前真菌感染常用檢查方法有：直接鏡檢、革蘭染色、吉姆薩染色、PAS法、六胺銀法(GMS)、培養(yǎng)法、Gridley染色、粘蛋白卡紅、巴氏染色法等，其中：(1)直接鏡檢：直接鏡檢的方法方便經濟，可采用不染色的濕片如KOH涂片或乳酸酚棉藍涂片。對淺表和皮下真菌感染最有幫助，一般在有菌部位發(fā)現大量真菌菌絲即可作出診斷，可在幾分鐘內完成，并且觀察到的真菌形態(tài)可以提供有價值的臨床信息；(2)革蘭染色：所有真菌、放線菌均為革蘭染色陽性，被染成藍黑色。適用于酵母菌、孢子絲菌、組織胞漿菌及諾卡菌放線菌的感染；(3)吉姆薩染色：可用于骨髓涂片和其他標本中莢膜組織胞漿菌和馬內菲青霉的檢測；(4)PAS法：用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游離出醛基，后者與無色品紅結合生成新的品紅色復合物而被顯色；(5)六胺銀法(GMS)：用鉻酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基，醛基還原六胺銀內的銀離子為黑色的金屬銀而顯色；(6)培養(yǎng)法：指對臨床標本進行培養(yǎng)，目的在于分離致病真菌，以明確是否存在真菌感染，特別是在直接鏡檢為陰性時，可從疑似患者身上采集標本，進一步進行真菌培養(yǎng)。一般培養(yǎng)超過2至4周以上依然沒有真菌生長，才可報告陰性。

以上特殊染色法以及培養(yǎng)法的優(yōu)勢在于：在控制好染色或培養(yǎng)細節(jié)的前提下，可染出漂亮的真菌形態(tài)，容易辨識，而且其中培養(yǎng)法的檢測準確率非常高。但是其缺點在于：1.操作過程需要嚴格控制時間以及溫度等，稍有失誤即會影響成片效果，影響結果判斷，對操作人員專業(yè)技能要求比較高；2.操作繁瑣，用時長(1小時左右)，培養(yǎng)法則需要2-4周，容易導致診斷不及時從而延誤治療；3.每種染色法需要使用的試劑多樣，管理儲存不便。

為了診斷真菌感染性疾病，通常采用熒光染色液，真菌熒光染色液中的熒光素可以高親和力地與真菌細胞壁上的β-多糖，如幾丁質與纖維素等結合，從而標記樣品中存在的真菌成分，并在熒光顯微鏡下可以清楚的觀察到真菌形態(tài)，所以真菌熒光染色液作為一種快速定性檢測真菌的新型染色液，有著操作方便、敏感度高、準確率高的優(yōu)勢，可以替代傳統(tǒng)鏡檢法，與真菌培養(yǎng)法形成完美互補，在感染早期為真菌病患者贏得最寶貴的治療時機。