[發明專利]基于木霉-芽孢桿菌順序接種共生培養發酵液的生物種衣劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202110700561.2
• 申請日: 2021-06-23
• 公開（公告）號: CN113444649A
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 陳捷;劉鵬;王新華
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/20;C12N3/00;C12N11/14;C12P21/02;C12P17/10;A01N63/38;A01N63/22;A01P3/00;A01C1/06;C12R1/07;C12R1/885
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種基于木霉-芽孢桿菌順序接種共生培養發酵液，其特征在于，所述木霉接種量為總發酵量的1-2％v/v，先單一接種木霉，并在25℃-28℃培養35-45小時，再接種芽孢桿菌，接種量為總發酵量的2.0-3.0％v/v，28-30℃共培養48小時。

2.一種生物種衣劑，其特征在于，所述生物種衣劑包括如權利要求1所述的基于木霉-芽孢桿菌順序接種共生培養發酵液。

3.根據權利要求2所述的生物種衣劑，其特征在，所述木霉-芽孢桿菌共生培養發酵液的標志物丙甲菌素含量為0.04-0.05μg/L，吲哚乙酸含量為900-1000μg/L，木霉孢子含量為1.0-9.0×10⁸cfu/L，芽孢桿菌孢子含量為1.0-9.0×10⁹cfu/L。

4.根據權利要求2所述的生物種衣劑，其特征在于，所述生物種衣劑采用干粉型。

5.根據權利要求2所述的生物種衣劑，其特征在于，包括木霉-芽孢桿菌共生培養菌物、硅藻土和蕓苔素內酯組分，具體如下：

木霉-芽孢桿菌共生培養菌物：20％-30％w/w

硅藻土：40-60％w/w

蕓苔素內酯：12％-20％w/w，所述蕓苔素內脂為0.1％可溶液。

6.一種如權利要求2-5中任意一項所述的生物種衣劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟S1.制備木霉-芽孢桿菌共生發酵液；

步驟S2.制備木霉-芽孢桿菌共生發酵液與硅藻土混合和蕓苔素內酯混合；

步驟S3.檢測粉劑型種衣劑質量。

7.根據權利要求6所述的生物種衣劑的制備方法，其特征在于，所述木霉菌株為深綠木霉菌SG3403，所述芽孢菌株為枯草芽孢桿菌B22。

8.根據權利要求6所述的生物種衣劑的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中，具體操作如下：

將木霉菌株接種在PDA培養基中，在28℃條件下培養5天后，利用5mm打孔器打孔，接種于PD培養基中，在PD培養基28℃培養3天，木霉種子液接種于發酵罐共生培養基中發酵，發酵35-45小時，將芽孢桿菌接種在LBA培養基中，在30℃條件下培養2天后，利用5mm打孔器打孔，接種于LB培養基中，在LB培養基培養2天，接種于已具有木霉發酵液的共生培養基,再發酵45-50h。

9.根據權利要求8所述的生物種衣劑的制備方法，其特征在于，所述發酵罐的共生培養基為：20g/L糖蜜、20g/L酵母浸出粉、20g/L玉米粉，pH由氫氧化鈉標定至5.8～6.0。

10.根據權利要求8所述的生物種衣劑的制備方法，其特征在于，所述木霉接種量為總發酵量的1.0-2.0％，芽孢桿菌接種量為總發酵量的2.0-3.0％；

下罐時溶氧反彈為發酵起始值的100％，pH為7.3，轉速120rpm，共發酵時間為45-50h，芽孢桿菌孢子形成85％，木霉菌厚垣孢子形成90％；

利用木霉-芽孢共同發酵模式，其共生種種衣劑拮抗和促生評價指標為，木霉厚垣孢子含量為1.0-2.0×10⁸cfu/g，芽孢桿菌孢子含量為3.0-5.0×10⁹cfu/g，作為抗菌肽的丙甲菌素0.1-0.5μg/g，吲哚乙酸含量2000-2500μg/g。