[發明專利]一種鑒別梅花鹿或馬鹿鹿角膠的特征多肽及其應用

在審

• 申請號: 202110698611.8
• 申請日: 2021-06-23
• 公開（公告）號: CN113480599A
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 薛菲;林永強;汪冰;焦陽;尹雪;馬雙成;于雅萌;周倩倩;于鳳蕊;丁勃
• 申請（專利權）人: 山東省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;G01N27/62
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 陳娟

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種鑒別梅花鹿或馬鹿鹿角膠的特征多肽及其應用。本發明提供的特征多肽為：肽段1如SEQ ID No.1所示：ASTGAALVVR；肽段2如SEQ ID No.2所示：TPVGQGPSVPVPNR。本發明提供的特征多肽及檢測方法，為數據庫缺乏的近緣物種中特征肽段的尋找提供了參考。本發明提供的特征多肽針對梅花鹿或馬鹿的鹿角膠具有優異的專屬性和穩定性，特異性強，可用于鹿角膠藥材及添加鹿角膠藥材中成藥的鑒別，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種鑒別梅花鹿或馬鹿鹿角膠的特征多肽及其應用。

背景技術

《中國藥典》2020年版中載明，鹿角膠是以梅花鹿或馬鹿的鹿角為原料，以水煎后的膠液濃縮后制得的。有溫補肝腎，益精養血的效果^[1]。由于鹿角中膠原蛋白含量少，制備時得膠率低，其價格遠遠貴于阿膠。

中國是世界上產鹿種類最多的國家，世界鹿科動物現存38種，我國有16種。鹿角膠由于制備困難、原材料昂貴等原因，部分廠家以非馬鹿、梅花鹿角投料的現象屢見不鮮。目前，對鹿角膠的鑒別檢驗專屬性較差，《中國藥典》2020年版中鹿角膠項下鑒別檢驗使用的特征肽段離子對無法將梅花鹿和馬鹿與其他近緣物種區分。

近年來，關于使用特征肽段對天然藥物進行定性或定量研究的報道越來越多。如鞏麗萍等利用特征肽段對阿膠中皮源進行鑒別，可以精準鑒別出阿膠中是否摻雜了馬皮，程顯隆等使用主成分分析等手段找到了鹿角膠相對于阿膠、新阿膠、黃明膠、龜甲膠的特征離子對。房芳等結合鳥槍蛋白組學技術對不同物種的熱穩定特征肽進行檢測和鑒定等，都對特征肽段鑒別動物源性做出大量研究。而現有技術中，由于鹿種屬蛋白數據比較少，難以查找到目標特征肽段，主要由于以下幾點：1.梅花鹿、馬鹿及其偽品駝鹿、馴鹿、黇鹿、白唇鹿、白尾鹿等同為鹿科哺乳動物，遺傳物質相似度高，所對應蛋白質的相似度高，較難找到差異；2.梅花鹿的自然種群現在僅分布在東北亞，即俄羅斯的烏蘇里地區到中國、中國臺灣、越南北部和日本等國家和地區；而鹿角膠僅在中國大規模使用，對于梅花鹿茸蛋白質組學的研究材料很少，可參考的蛋白質數據庫匱乏，尤其是膠原蛋白及角蛋白的研究數據比較少，難以通過庫內比對序列的方法找到不同鹿科動物膠的差異肽段。目前，尚未有針對梅花鹿馬鹿與其他鹿科動物進行鑒別、準確區分的方法。

發明內容

針對現有技術中存在的技術空白，本發明提供了一種鑒別梅花鹿或馬鹿鹿角膠的特征多肽。

本發明還提供了上述特征多肽在鑒別梅花鹿或馬鹿鹿角膠種屬鑒別中的應用。

本發明為了實現上述目的所采用的技術方案為：

本發明提供了一種鑒別梅花鹿或馬鹿鹿角膠的特征多肽，所述特征多肽具體為：肽段1如SEQ ID No.1所示：ASTGAALVVR；肽段2如SEQ ID No.2所示：TPVGQGPSVPVPNR。

進一步的，所述SEQ ID No.1肽段1的質荷比為472.77；所述SEQ ID No.2肽段2的質荷比為702.88。

本發明還提供了一種用于鑒別梅花鹿或馬鹿鹿角膠的試劑盒，所述試劑盒中包含權利要求1或2所述的特征多肽。

本發明還提供了一種利用上述特征多肽鑒別梅花鹿或馬鹿鹿角膠的方法，包括以下步驟：

（1）對待測樣品進行前處理，得待檢測溶液；

（2）將待檢測溶液通過液相-三重四級桿質譜法進行檢測，分析對比待檢測溶液中的質譜結果同肽段1、肽段2的質譜圖，當質譜圖中出現肽段1或肽段2的質譜圖時，可判斷待測樣品為梅花鹿或馬鹿的鹿角膠。

進一步的，待測樣品的前處理具體過程為：樣品粉碎，稱取樣品粉末0.1g，加碳酸氫銨溶液50ml，超聲處理30min，用微孔濾膜過濾，取續濾液100μL，加牛胰蛋白酶溶液1μL，37℃酶解4h，取出放冷至室溫，即得。

進一步的，所述碳酸氫銨的質量濃度為1%。