[發明專利]一種M1型巨噬細胞外泌體疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110698573.6
• 申請日: 2021-06-23
• 公開（公告）號: CN113398258B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 李振華;劉會芳;呂芳芳;張金超
• 申請（專利權）人: 河北大學
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P35/00;A61P37/02;C12N5/0786
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 張莉靜

1.一種M1型巨噬細胞外泌體疫苗，其特征是，所述外泌體疫苗通過以下方法制備：

（a）攜帶抗原的M1型巨噬細胞的培養：用50-200ng/mL的脂多糖對培養的原代巨噬細胞孵育12-24 h，使原代巨噬細胞極化為M1型巨噬細胞；然后用0.05-0.15mg/mL的腫瘤抗原OVA與M1型巨噬細胞共孵育24-48 h，得到攜帶腫瘤抗原OVA的M1型巨噬細胞；

（b）提取外泌體疫苗：將上述細胞正常培養2天后收集細胞培養上清液，先利用 100 KD超濾離心管在 4500 g 轉速4°C條件下離心，濃縮外泌體并除去培養上清中的小顆粒雜質；濃縮后的細胞上清在轉速2000 g，4°C，30 min 離心，收集上清，然在轉速10000 g，4°C，45min 再次離心，以去除較大的囊泡；取上清，經0.45 μm濾膜過濾，收集過濾液；將過濾液移至新的離心管中，選擇超速轉子，4°C，100000 g 離心70 min；去除上清，用 10 mL 預冷的PBS重懸后，選擇超速轉子，再次4°C，100000 g，超速離心70 min；去除上清，用100 μL預冷的PBS重懸，得到M1_OVA-Exos外泌體疫苗。

2.根據權利要求1所述的外泌體疫苗，其特征是，所述原代巨噬細胞為人或小鼠來源的巨噬細胞。

3.權利要求1所述的M1型巨噬細胞外泌體疫苗在制備針對腫瘤微環境的免疫調節藥物中的應用。