[發明專利]與白菜紫色性狀相關的InDel分子標記及其應用

有效

• 申請號: 202110697892.5
• 申請日: 2021-06-23
• 公開（公告）號: CN113355446B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 張淑江;李菲;謝露露;李國亮;劉雨佳;章時蕃;張慧;孫日飛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發明涉及分子標記輔助育種技術領域，具體涉及與白菜紫色性狀相關的InDel分子標記及其應用。本發明提供與白菜紫色性狀相關的InDel分子標記，所述InDel分子標記的多態性為缺失/插入序列，通過序列如SEQ ID NO.2?3所示的特異性引物擴增得到。該分子標記可用于區分鑒定紫色白菜和綠色白菜，具有較高的準確性，可作為紫色白菜育種的分子標記輔助選擇工具，在實際生產中具有重要意義。

技術領域

本發明涉及分子標記輔助育種技術領域，具體涉及與白菜紫色性狀相關的InDel分子標記及其應用。

背景技術

白菜是十字花科、蕓薹屬的草本植物。大白菜(Brassica rapaL.ssp.pekinensis)為白菜的一種，是原產于中國的一種蔬菜作物，在中國的蕓薹屬蔬菜作物當中種類多，種植面積廣，在生產中占據十分重要的經濟地位。紫色大白菜和綠色大白菜是白菜的兩種不同表型顏色，紫色大白菜表現為葉片上、下表皮均為紫色，內葉至外葉均為紫色，綠色大白菜則整株為綠色，其表型差異主要由花青素含量不同所致。

花青素苷屬類黃酮類物質，為構成植物顏色的重要水溶性色素之一，常見花青素有6種，包括矢車菊花青素苷(Cyanidin)、天竺葵花青素苷(Pelargonidin)、芍藥花青素苷(Peonidin)、錦葵花青素苷(Malvidin)、矮牽牛花青素苷(Petunidin)、飛燕草色素(Delpinidin)。花青素不僅使紫色大白菜葉色鮮亮，還具有保健功能，有研究表明其強大的抗氧化能力能幫助人類預防癌癥、心腦血管等疾病。近年來育種學家對紫色基因進行遺傳性狀、花青素成分測定、基因定位及相關基因的表達進行了研究，探索花青素表達模式及決定基因。

隨分子生物學技術逐漸發展，人們對白菜類蔬菜葉色相關基因做了許多研究，研究葉色決定基因及其定位，并分析其調控機理。對葉色決定基因進行定位研究，發現不同葉色決定基因分別定位于A02、A03、A07、A09染色體，于不同材料中，對白菜葉色調控起一定作用的基因位于不同染色體，表明白菜葉色調控過程相對復雜。調控花青素代謝途徑的轉錄調控蛋白主要有三類，R2R2-MYB、bHLH及WDR，其中R2R2-MYB、bHLH屬于轉錄調控因子，WDR參與調控過程，三者組成MBW三元復合體。與白菜葉色相關基因調控過程相對復雜，開發大白菜葉色相關基因的分子標記對研究白菜紫色基因和紫色性狀具有一定意義，并能夠作為一種分子標記輔助育種手段。

發明內容

本發明的目的是提供一種與白菜紫色性狀相關的InDel分子標記，本發明的另一目的是提供該分子標記的應用。

第一方面，本發明提供與白菜紫色性狀相關的InDel分子標記，所述InDel分子標記的多態性為缺失/插入序列，所述分子標記通過序列如SEQ ID NO.2-3所示的特異性引物擴增得到。

正向引物：5’-ATGGATGATCTGTCGTATAGGTT-3’(SEQ ID NO.2)；

反向引物：5’-CTAATCAAGCTCCCCAGTCTCTTC-3’(SEQ ID NO.3)。

優選地，所述插入序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。如SEQ ID NO.1所示的序列為紫色白菜A02染色體的葉色相關基因特有序列，與白菜的紫色基因緊密連鎖。

以上所示的正向引物和反向引物涵蓋的待擴增區域為本發明所述的紫色白菜A02染色體的葉色相關基因特有序列的全部序列。

第二方面，本發明提供用于檢測所述InDel分子標記的特異性引物對，其序列如SEQ ID NO.2-3所示。

第三方面，本發明提供含有所述特異性引物對的試劑盒。

優選地，所述試劑盒還包括用于PCR擴增的其他試劑，包括但不限于PCR反應緩沖液、DNA聚合酶、dNTP、ddH₂O等。