[發(fā)明專利]一種組織切片抗原修復(fù)液及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110693632.0
• 申請日: 2021-06-22
• 公開（公告）號: CN113495138A
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵敬國
• 申請（專利權(quán)）人: 南京弗瑞思生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 朱虹

本發(fā)明提出了一種組織切片抗原修復(fù)液及其使用方法，該抗原修復(fù)液為Tris/EDTA修復(fù)緩沖液，1L抗原修復(fù)液中包含Base Tris 1.9?2.5g和EDTA 0.7?1.1g，加緩沖液稀釋至1L，本申請通過優(yōu)化Tris/EDTA修復(fù)液中EDTA和Tris?base的比例配方，并針對性調(diào)整修復(fù)應(yīng)用過程中的加熱條件，有效提高了免疫組化實驗中難以修復(fù)的抗原暴露度，使難以暴露的抗原得到很好的修復(fù)，在后續(xù)的實驗中能很好的和一抗抗體相結(jié)合，同時又不至于修復(fù)過度產(chǎn)生不必要的非特異性染色，綜合修復(fù)效率顯著提高，高效實用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫組化技術(shù)領(lǐng)域，具體的為一種組織切片抗原修復(fù)液及其使用方法。

背景技術(shù)

免疫組織化學(xué)技術(shù)是近年來病理診斷迅速發(fā)展的檢測技術(shù)，作為一種重要的病理輔助診斷方法，在臨床的應(yīng)用中日益受到重視。隨著全自動免疫組化染色儀的應(yīng)用推廣，對于染色質(zhì)量的要求也日益提高。其中，抗原修復(fù)在整個免疫組化染色過程中有著極其重要的作用，修復(fù)條件的好壞直接決定著最終染色結(jié)果的質(zhì)量。

目前同類型產(chǎn)品有多種不同類型的修復(fù)液，常用的有枸櫞酸鈉緩沖液和Tris/EDTA 緩沖液。枸櫞酸鈉緩沖液PH值在6左右，簡稱AR6，Tris/EDTA 緩沖液的PH值在9左右，簡稱AR9，這兩類修復(fù)液廣泛應(yīng)用于免疫組化和熒光免疫組化實驗的抗原修復(fù)過程。

枸櫞酸鈉緩沖液主要成分是：10 mM 檸檬酸鈉，0.05% 吐溫20。Tris/EDTA緩沖液的主要成分：1L緩沖液中含EDTA 0.292 g，Tris-base 6.05 g。

抗原修復(fù)液的作用原理：在固定過程中甲醛和樣本中的蛋白結(jié)合產(chǎn)生了交聯(lián)，屏蔽了抗原位點。利用化學(xué)試劑（修復(fù)液）和熱的作用將這些交聯(lián)打斷，使抗原表位重新暴露出來，以便于后續(xù)實驗樣本中的抗原與抗體結(jié)合。

常用的枸櫞酸鈉和Tris/EDTA對大部分的蛋白修復(fù)效果都可以，但是存在少數(shù)較難暴露的蛋白抗原，如核蛋白和跨膜蛋白的中間段，比較難以暴露，對于這類難暴露的蛋白實驗結(jié)果容易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果，導(dǎo)致實驗結(jié)果判斷錯誤。此外，對于部分蛋白還會出現(xiàn)修復(fù)過渡導(dǎo)致的非特異性染色，極大影響修復(fù)質(zhì)量和后續(xù)試驗操作。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種組織切片抗原修復(fù)液及其使用方法，通過優(yōu)化Tris/EDTA修復(fù)液中EDTA 和Tris-base的比例配方，并針對性調(diào)整修復(fù)應(yīng)用過程中的加熱條件，有效提高了免疫組化實驗中難以修復(fù)的抗原暴露度，使難以暴露的抗原得到很好的修復(fù)，在后續(xù)的實驗中能很好的和一抗抗體相結(jié)合，同時又不至于修復(fù)過度產(chǎn)生不必要的非特異性染色，綜合修復(fù)效率顯著提高，高效實用。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種組織切片抗原修復(fù)液，該抗原修復(fù)液為Tris/EDTA修復(fù)緩沖液，1L抗原修復(fù)液中包含Base Tris 1.9-2.5g和EDTA 0.7-1.1g，加緩沖液稀釋至1L。

作為本發(fā)明進一步優(yōu)選，緩沖液為1xTBST溶液，由10xTBST溶液稀釋10倍后制備。

作為本發(fā)明進一步優(yōu)選，10xTBST配制方法為，先稱量NaCL 87.6g，倒入燒杯中，加入雙蒸水800ml，Tris-HCL 100ml，加5ml吐溫20，溶解后轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中定容至1L。

作為本發(fā)明進一步優(yōu)選，組織切片抗原修復(fù)液使用方法，包括以下步驟：

1）按配方配置Tris/EDTA修復(fù)緩沖液，備用；將組織切片樣本拷片脫蠟，備用；

2）將步驟1）中修復(fù)緩沖液導(dǎo)入免疫組化染色缸中，置入微波爐中高火加熱至沸騰；

3）將步驟1）中脫蠟后的樣本玻片置入沸騰的修復(fù)緩沖液中繼續(xù)中高火加熱5分鐘；

4）轉(zhuǎn)中小火繼續(xù)加熱15分鐘，取出，待自然冷卻后即可，實際操作中，則進入下步操作，DAPI染色或封閉等。