[發(fā)明專利]一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110693218.X | 申請日： | 2021-06-22 |
| 公開（公告）號： | CN113337642A | 公開（公告）日： | 2021-09-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 戴雙雙;陳星云;王璐;劉陽珸玥;陳姍;黃剛;李軍;許志臻;鐘丹;謝靜;李昊洋 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 重慶中之信知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50213 | 代理人： | 仇倩倩 |
| 地址： | 40003*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 新型 冠狀病毒 rt pcr 試劑盒 | ||
1.一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含2019-nCoVRT-PCR檢測反應(yīng)液，所述2019-nCoV RT-PCR檢測反應(yīng)液包含ORF1ab基因、N基因和RNase P基因的特異性引物；所述ORF1ab基因的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述N基因的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述RNase P基因的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述2019-nCoV RT-PCR檢測反應(yīng)液還包含ORF1ab基因、N基因和RNase P基因的探針，所述ORF1ab基因的探針核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述N基因的探針核苷酸序列如SEQ IDNO:8所示，所述RNase P基因的探針核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述ORF1ab基因探針的5’修飾為FAM，3’修飾為BHQ1；所述N基因探針的5’修飾為HEX，3’修飾為BHQ1；所述RNase P基因探針的5’修飾為Cy5，3’修飾為BHQ3。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述2019-nCoV RT-PCR檢測反應(yīng)液還包括Buffer、RNase Free dH2O，所述試劑盒還包括RT-PCR酶、2019-nCoV陽性對照品、2019-nCoV陰性對照品、2019-nCoV樣本核酸釋放劑A液和2019-nCoV樣本核酸釋放劑B液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述RT-PCR酶為Taq酶和反轉(zhuǎn)錄酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述2019-nCoV陽性對照品為濃度為106copies/mL的2019-nCoV-CDC陽性質(zhì)粒，所述2019-nCoV陰性對照品為RNase Free dH2O，所述2019-nCoV樣本核酸釋放劑A液由氫氧化鈉，曲拉通X-100，Tris-HCl，乙基苯基聚乙二醇，吐溫20，氯化鈉，氯化鉀，蛋白酶K，十二烷基硫酸鋰制備而成，所述2019-nCoV樣本核酸釋放劑B液由曲拉通X-100，Tris-HCl，吐溫20，乙基苯基聚乙二醇，氯化鈉，氯化鉀制備而成。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應(yīng)體系為：
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的反應(yīng)條件如下：
反轉(zhuǎn)錄：42℃5min,1個循環(huán)；
預(yù)變性：95℃10sec，1個循環(huán)；
PCR：95℃5sec：60.8℃20sec，共40個循環(huán)，在每次60.8℃結(jié)束后收集熒光。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒檢測的樣本為經(jīng)56℃、30min滅活的病毒樣本。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種檢測新型冠狀病毒的RT-PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒待測樣本的提取方法如下：
1)將病毒滅活的樣本和2019-nCoV樣本核酸釋放劑A液在RNase free collectiontube中于65℃放置5min；
2)加入核酸釋放劑B液，振蕩5～10sec，25℃放置10min得到待測樣本混合液。
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