[發(fā)明專利]一種基于pH敏感碳點(diǎn)和脲酶檢測(cè)牛奶中尿素的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110693082.2
• 申請(qǐng)日: 2021-06-22
• 公開（公告）號(hào): CN113504208B
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳國(guó)慶;殷文志;朱拓;吳亞敏;辜姣;馬超群;李磊;朱純;高輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/34
• 分類號(hào): C12Q1/34
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 彭素琴

1.一種基于pH敏感碳點(diǎn)和脲酶檢測(cè)牛奶中尿素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)將3，5-二氨基苯甲酸分散在乙醇中進(jìn)行溶劑熱反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，純化，獲得pH敏感碳點(diǎn)；

(2)利用在牛奶中加入尿素配置得到一系列已知尿素濃度的標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣品，然后將所得pH敏感碳點(diǎn)和脲酶加入到一系列已知尿素濃度的標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣品中，靜置，然后測(cè)定相應(yīng)的熒光發(fā)射光譜；同時(shí)，測(cè)定不加入尿素的牛奶樣品的熒光發(fā)射光譜；

(3)采集不加入尿素時(shí)熒光發(fā)射光譜中490nm波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度峰值F₀，以及一系列已知尿素濃度的標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣品的熒光發(fā)射光譜中490nm波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度峰值F；計(jì)算得到不同尿素濃度的淬滅程度C＝(F₀-F)/F₀；利用淬滅程度C與尿素濃度構(gòu)建線性檢測(cè)模型；

(4)按照步驟(2)測(cè)定待測(cè)樣品的熒光發(fā)射光譜，獲得相應(yīng)的淬滅程度C；然后通過(guò)步驟(3)中的檢測(cè)模型計(jì)算得到待測(cè)樣品中的尿素濃度；

步驟(2)中pH敏感碳點(diǎn)是以分散液的方式加入到樣品中，分散液390nm處吸收峰的吸光度為0.066；

pH敏感碳點(diǎn)的體積與標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣品的體積比為1：2。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，將每0.4g的3，5-二氨基苯甲酸質(zhì)量分散在40mL乙醇中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中溶劑熱反應(yīng)的條件為：在180℃下反應(yīng)12h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中溶劑熱反應(yīng)是在含有四氟乙烯內(nèi)襯的高壓釜中進(jìn)行的，四氟乙烯內(nèi)襯的容積100毫升。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中所述純化通過(guò)柱色譜法進(jìn)行，固定相是硅膠，流動(dòng)相是甲醇和二氯甲烷的混合物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，流動(dòng)相的甲醇和二氯甲烷的混合比為4:1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述靜置的時(shí)間為40分鐘，溫度為20℃-30℃。

8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的方法在食品檢測(cè)領(lǐng)域中的應(yīng)用。