[發(fā)明專利]一種基于群體感應(yīng)系統(tǒng)的變異鏈球菌的檢測(cè)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110690715.4
• 申請(qǐng)日: 2021-06-22
• 公開（公告）號(hào): CN113481135B
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐勇軍;張麗君;吳衛(wèi)佳;林瑞鑫;朱理圳;楊東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12N15/65;G01N21/64;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市深聯(lián)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44357
• 代理人: 李成龍

本發(fā)明公開了一種基于群體感應(yīng)系統(tǒng)的變異鏈球菌的檢測(cè)方法及其應(yīng)用，屬于涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，該檢測(cè)方法是基于群體感應(yīng)系統(tǒng)建立的，所述感應(yīng)系統(tǒng)的元件包括大腸桿菌的信號(hào)肽和組氨酸激酶受體膜蛋白基因復(fù)合的基因PelB?comD、胞內(nèi)反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白基因comE，以及受comE調(diào)控激活的啟動(dòng)子nlmC復(fù)合綠色熒光信號(hào)報(bào)告基因sfGFP的基因nlmC?sfGFP；該檢測(cè)方法通過(guò)所述感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)變異鏈球菌分泌表達(dá)的信號(hào)分子CSP進(jìn)行特異性識(shí)別響應(yīng)，進(jìn)而對(duì)變異鏈球菌進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明檢測(cè)方法能夠特異性識(shí)別檢測(cè)變異鏈球菌，具有操作便捷，檢測(cè)成本低的特點(diǎn)，該檢測(cè)方法可應(yīng)用于齲齒檢測(cè)中，進(jìn)而對(duì)牙齒健康狀況進(jìn)行評(píng)估。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體屬于一種基于群體感應(yīng)系統(tǒng)的變異鏈球菌檢測(cè)方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

變異鏈球菌(Streptococcus?mutans)，是一種生長(zhǎng)于口腔的細(xì)菌，具有分泌酸性物質(zhì)腐蝕牙釉質(zhì)的特點(diǎn)，是口腔主要的致齲齒細(xì)菌之一，常常見于牙菌斑中。變異鏈球菌可通過(guò)代謝產(chǎn)生的酸性物質(zhì)進(jìn)行腐蝕，進(jìn)而導(dǎo)致齲齒的發(fā)生，其在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域被廣泛研究。

然而，目前檢測(cè)變異鏈球菌的方法比較單一，而且需要昂貴的儀器和高精度的操作相配合，比如目前主要使用于檢測(cè)變異鏈球菌的PCR技術(shù)，操作起來(lái)比較復(fù)雜，而且所需使用的設(shè)備復(fù)雜又昂貴，檢測(cè)成本比較高。因此，亟需研發(fā)出一種不需要使用太多復(fù)雜昂貴的儀器設(shè)備，操作起來(lái)相對(duì)簡(jiǎn)單，檢測(cè)成本低，并且在普通的培養(yǎng)條件下即可對(duì)變異鏈球菌進(jìn)行檢測(cè)的方法。

此外，PCR技術(shù)雖然具有檢測(cè)靈敏度高和特異性高的特點(diǎn)，但這樣一來(lái)，對(duì)檢測(cè)的錯(cuò)誤也有放大作用，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性等不準(zhǔn)確的結(jié)果，所以，也亟需其他檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行補(bǔ)充，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

群體感應(yīng)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)是一種相對(duì)經(jīng)濟(jì)、操作簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法，然而目前并未被應(yīng)用于變異鏈球菌的檢測(cè)當(dāng)中，也沒有找到適合的群體感應(yīng)系統(tǒng)元件，而且如何構(gòu)建依然是個(gè)謎團(tuán)，實(shí)施起來(lái)也是困難重重。因此，到目前為止，還是沒有找到對(duì)變異鏈球菌可以進(jìn)行補(bǔ)充檢測(cè)的有效方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)背景技術(shù)中存在的缺陷和不足，本發(fā)明提供了一種基于群體感應(yīng)系統(tǒng)的變異鏈球菌的檢測(cè)方法，該方法能夠特異性識(shí)別檢測(cè)變異鏈球菌，具有操作便捷，檢測(cè)成本低的特點(diǎn)。

本發(fā)明的目的之二是將上述一種基于群體感應(yīng)系統(tǒng)的變異鏈球菌的檢測(cè)方法應(yīng)用于齲齒檢測(cè)中，進(jìn)而可以對(duì)牙齒健康狀況進(jìn)行評(píng)估。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種基于群體感應(yīng)系統(tǒng)的變異鏈球菌的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法是基于群體感應(yīng)系統(tǒng)建立的，所述感應(yīng)系統(tǒng)的元件包括大腸桿菌的信號(hào)肽和組氨酸激酶受體膜蛋白基因復(fù)合的基因PelB-comD、胞內(nèi)反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白基因comE，以及受comE調(diào)控激活的啟動(dòng)子nlmC復(fù)合綠色熒光信號(hào)報(bào)告基因sfGFP的基因nlmC-sfGFP；

該檢測(cè)方法通過(guò)所述感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)變異鏈球菌分泌表達(dá)的信號(hào)分子CSP進(jìn)行特異性識(shí)別響應(yīng)，進(jìn)而對(duì)變異鏈球菌進(jìn)行檢測(cè)。

進(jìn)一步所采取的措施是：所述感應(yīng)系統(tǒng)通過(guò)所述基因comD、comE和nlmC識(shí)別響應(yīng)所述CSP的濃度變化。

進(jìn)一步所采取的措施是：所述PelB-comD、comE和nlmC-sfGFP的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：5所示。

進(jìn)一步所采取的措施是：所述PelB-comD的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

進(jìn)一步所采取的措施是：所述comE的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。

進(jìn)一步所采取的措施是：還包括表達(dá)載體的構(gòu)建，所述感應(yīng)系統(tǒng)構(gòu)建于表達(dá)載體上。