[發明專利]一種鐵粒幼紅細胞性貧血檢測引物組合物及應用

有效

• 申請號: 202110690403.3
• 申請日: 2021-06-22
• 公開（公告）號: CN113481289B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 李靜;汝昆;藺亞妮
• 申請（專利權）人: 天津見康華美醫學診斷技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 尉月麗

本發明提供了一種用于檢測鐵粒幼紅細胞性貧血基因的引物組合物及其應用，涉及分子生物學技術領域。利用本發明提供的與SA相關基因突變的基因群，結合高通量測序技術，可一次性檢測所述2個基因的342個基因突變位點，覆蓋面廣，檢測效率高，具有操作簡便、精確度、準確性、靈敏度高等優點，解決了目前檢測準確性低、檢測方法局限的技術缺陷，同時可實現在骨髓形態學和血常規檢查之外對SA進行輔助診斷，特別是對于疾病后續的治療方向和效果做出預判具有特殊的優勢，可彌補臨床SA在分子診斷、疾病演變、治療、預后、用藥等指導方面的不足。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種用于檢測鐵粒幼紅細胞性貧血基因的引物組合物及其應用。

背景技術

鐵粒幼紅細胞貧血(sideroblastic anemia，SA)是由不同病因引起的血紅素合成障礙和鐵利用不良所致的一組罕見的異質性疾病，其共同特征為骨髓中出現大量環形鐵粒幼細胞、紅系無效造血、組織鐵增高和外周血出現不同比例低色素性紅細胞。鐵粒幼細胞貧血可分為遺傳性和獲得性兩類，不同類型的SA治療策略和轉歸存在差異。遺傳性鐵粒幼紅細胞貧血多為X染色體性聯遺傳，患者貧血程度差別很大，有些輕度貧血者不做家系調查極易漏診，應用藥理劑量的吡多醇治療ALAS2導致的遺傳性SA部分患者可獲益。獲得性鐵粒幼細胞貧血可近一步分為原發性和繼發性。繼發性鐵粒幼細胞貧血可由于服用藥物、飲酒和鉛、鋅等中毒所致。原發性鐵粒幼貧血主要包括骨髓增生異常綜合征伴環形鐵粒幼細胞(Myelodysplastic syndrome with ring sideroblasts，MDS-RS)等，該疾病可進展為急性白血病。偶見有明顯家族性發病的鐵粒幼細胞貧血患者出現骨髓增生異常綜合征的情況。鐵過多是SA常見的并發癥，尤其在疾病晚期，嚴重者可危及生命導致死亡。此外，還可見肝脾腫大、糖尿病、皮膚色素沉著、心律失常、免疫功能低下等并發癥。

目前，對SA的診斷尚無明確診斷指南參考，其臨床表現及實驗室檢查項目缺乏特異性。患者有明確的家族史有助于遺傳性SA的診斷。遺傳性SA發病年齡輕，除少數典型病例于出生后或嬰兒時期出現貧血，大多數患者于10-20歲左右出現貧血，偶有至50-60歲后才被發現；遺傳性SA常見為小細胞低色素性貧血，偶有大細胞性貧血；同時，遺傳性SA患者血清含鐵更高。因此，患者發病年齡、貧血性質、鐵代謝等指標對于遺傳性SA的診斷有重要的提示意義。由于骨髓鐵染色均表現有大量環形鐵粒幼細胞，年齡、小細胞或大細胞貧血、鐵代謝等指標均不具有明確的特異性，臨床上較難鑒別遺傳性SA和獲得性SA尤其是MDS-RS。而基因突變分析是遺傳性SA診斷的重要標準，目前可檢測出30-70％的遺傳性SA患者。

目前檢測SA的方法主要涉及血常規、細胞形態及分子生物學等。其中分子生物學的實驗方法主要有巢式PCR、一代測序等。PCR方法不能直觀的得到具體的突變序列，而一代測序的方法受到測序通量的影響，無法一次性檢測多個基因的全部外顯子區域。而二代測序作為一種高通量的檢測方法，可以一次性準確測量多個基因的外顯子序列，使精準治療成為可能。目前對于SA在應用二代測序的方法進行基因檢測鑒別方面的研究屈指可數，而SA在基因診斷水平的檢測尤為重要。

專利CN108192880A公開了一種人的δ-氨基酮戊酸合成酶突變蛋白及其應用，根據該δ-氨基酮戊酸合成酶突變蛋白制備基因芯片、單克隆抗體和ELISA試劑盒，為X連鎖遺傳性鐵粒幼細胞貧血和X連鎖紅細胞生成性血卟啉病的基因診斷提供指引作用，但所述方法僅針對人的δ-氨基酮戊酸合成酶突變蛋白，其檢出率較低。

因此，亟需一種精確度、準確性更高的SA檢測試劑盒及方法，以彌補臨床SA在分子診斷、疾病演變、治療、預后、用藥等指導方面的不足。

發明內容

針對上述不足，本發明提供了一種用于檢測鐵粒幼紅細胞貧血基因的引物組合物及其應用。采用本發明所述的引物組合物，檢測鐵粒幼紅細胞貧血相關基因，具有操作簡便、精確度、準確性、靈敏度高的優點，可彌補臨床SA在分子診斷、疾病演變、治療、預后、用藥等指導方面的不足。

為了實現上述發明目的，本發明的技術方案如下：