[發(fā)明專利]一種稻瘟病菌分生孢子的移植方法有效

申請?zhí)枺?/td>	202110688360.5	申請日：	2021-06-15
公開（公告）號：	CN113278578B	公開（公告）日：	2022-09-16
發(fā)明（設計）人：	張君成;張正淳;王忠文	申請（專利權）人：	廣西大學
主分類號：	C12N3/00	分類號：	C12N3/00;C12N1/14;C12R1/645
代理公司：	暫無信息	代理人：	暫無信息
地址：	530004 廣西壯族***	國省代碼：	廣西;45
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種稻瘟病分生孢子移植方法
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【說明書】：

一種稻瘟病菌分生孢子的移植方法，從產(chǎn)孢菌落上吸附孢子并直接移植到觀測平板上，孢子移植的操作步驟如下：1)病菌孢子的準備；2)工具的滅菌；3)觀測平板的準備；4)孢子的吸附與稀釋；5)孢子的釋放；6)培養(yǎng)觀測。本發(fā)明的優(yōu)點：1)不需要將關鍵的工作材料(稻瘟病菌的分生孢子)配備成孢子懸浮液，減少污染風險；2)可以在長條狀的培養(yǎng)平板上分散稻瘟病菌分生孢子，并觀測其萌發(fā)與生長活動，提高觀測工作的效率與效果，有利于開展孢子萌發(fā)生物學研究中的多因素作用設計與批量測試比較。

技術領域

本發(fā)明涉及植物病理學技術，具體是一種稻瘟病菌分生孢子的移植方法。

背景技術

稻瘟病是我國水稻生產(chǎn)的一種重要病害，可給水稻生產(chǎn)造成重大損失，甚至完全失收，該病害由稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)侵染引起。分生孢子是稻瘟病菌的無性繁殖體，在稻瘟病的病害循環(huán)和病害流行中發(fā)揮重要作用。充分認識分生孢子的萌發(fā)生物學對有效防控稻瘟病的發(fā)生流行至關重要。在稻瘟病菌繁殖體的萌發(fā)生物學及相關的研究工作中，經(jīng)常需要將分生孢子移植到培養(yǎng)平板上進行觀測培養(yǎng)，這種觀測培養(yǎng)不僅要求培養(yǎng)平板上的孢子處于恰當?shù)姆稚顟B(tài)，也要求各個移植處理平板上的孢子數(shù)量及分布保持一致。只有這樣才能高質(zhì)量完成有關的研究任務。

當前將稻瘟病菌分生孢子從菌落上轉(zhuǎn)移及分散到培養(yǎng)平板的方法，幾乎都是水液載體移植方法，該方法的主要程序是，先用適合的產(chǎn)孢培養(yǎng)基進行稻瘟病菌的產(chǎn)孢培養(yǎng)，再用水將產(chǎn)孢培養(yǎng)菌落的孢子洗滌出來，配備成孢子懸浮液(簡稱孢子液)，然后用移液器將孢子液定量轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基觀測平板面上，并用工具將孢子液涂布分散到平板上，再進行有關的培養(yǎng)與觀察等測試工作。該方法看似簡單，但實踐操作上仍存在相當?shù)碾y度與繁瑣，主要表現(xiàn)在，關鍵的工作材料(稻瘟病菌的分生孢子)的獲得技術操作中，往往需要采取過濾操作以脫減孢子液中的菌絲，也需要離心沉淀操作脫除孢子液中的培養(yǎng)基以及培養(yǎng)代謝產(chǎn)物等，這些操作過程均存在較大的污染風險，另外，需要將孢子液的孢子濃度調(diào)整到合適的范圍，因此需要反復的調(diào)配與取樣到計數(shù)板或載玻片，還要轉(zhuǎn)到生物顯微鏡下觀察計數(shù)，比較繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是，提供一種稻瘟病菌分生孢子的移植方法。

本發(fā)明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種稻瘟病菌分生孢子的移植方法，從產(chǎn)孢菌落上吸附孢子并直接移植及分散到觀測平板上，孢子移植的操作步驟如下：

1.病菌孢子的準備

用麥粒培養(yǎng)基進行稻瘟病菌的產(chǎn)孢培養(yǎng)，直至產(chǎn)孢基質(zhì)上形成大量的分生孢子。

2.工具的滅菌

將普通棉簽包裝于小燒杯內(nèi)，常規(guī)高溫滅菌后，用作稻瘟病菌分生孢子移植的工具。

3.觀測平板的準備

用常規(guī)瓊脂培養(yǎng)基制備孢子觀測平板，用滅菌刀片將培養(yǎng)皿倒制的瓊脂平板切成長條狀，并將切出的瓊脂條挑轉(zhuǎn)到滅菌載玻片上，作為分生孢子的觀測平板。

4.孢子的吸附與稀釋

取步驟2準備的滅菌棉簽，將端部棉球碰觸步驟1準備的產(chǎn)孢菌落而吸附菌落上的孢子；然后轉(zhuǎn)移到空白瓊脂平板上點印，稀釋棉球上吸附的密集孢子。