[發明專利]一種香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法

有效

• 申請號: 202110688357.3
• 申請日: 2021-06-15
• 公開（公告）號: CN113308512B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 王忠文;張君成;張正淳
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24;C12Q1/04;C12R1/77
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法，從產孢菌落上粘附孢子并直接移植及散布到觀測平板上，孢子的干式移植操作步驟如下：1)分生孢子的培養準備；2)移孢棉簽的無菌處理；3)觀測瓊脂平板的準備；4)密集孢子的分散；5)分生孢子的移印；6)分生孢子的培養處理。本發明的優點：1)不需要將關鍵的工作材料(香蕉枯萎病菌的分生孢子)配備成孢子懸浮液，減少污染風險。2)可以在條狀的瓊脂平板上散布香蕉枯萎病菌分生孢子，并觀測其萌發與生長活動，提高觀測工作的效率與效果，有利于開展孢子萌發生物學研究中的多因素作用設計與批量試比較。

技術領域

本發明涉及植物病理學技術，具體是一種香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法。

背景技術

香蕉枯萎病是我國香蕉產業的一種重要病害，可給香蕉生產造成重大損失，嚴重的可以毀掉整個香蕉園。該病害由香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)侵染引起。分生孢子是香蕉枯萎病菌的無性繁殖體，在香蕉枯萎病的病害循環和病害流行中發揮重要作用。充分認識分生孢子的萌發生物學對有效防控香蕉枯萎病的發生流行至關重要。在香蕉枯萎病菌繁殖體的萌發生物學及相關的研究工作中，經常需要將分生孢子移植到培養平板上進行觀測培養，這種觀測培養不僅要求培養平板上的孢子處于恰當的分散狀態，也要求各個移植處理平板上的孢子數量及分布保持一致。只有這樣才能高質量完成有關的研究任務。

當前將香蕉枯萎病菌分生孢子從菌落上轉移及分散到培養平板的方法，幾乎都是水液載體移植方法，該方法的主要程序是，先用適合的產孢培養基進行香蕉枯萎病菌的產孢培養，再用水將產孢培養菌落的孢子洗滌出來，配備成孢子懸浮液(簡稱孢子液)，然后用移液器將孢子液定量轉移到培養基觀測平板面上，并用工具將孢子液涂布分散到平板上，再進行有關的培養與觀察等測試工作。該方法看似簡單，但實踐操作上仍存在相當的難度與繁瑣，主要表現在，關鍵的工作材料(香蕉枯萎病菌的分生孢子)的獲得技術操作中，往往需要采取過濾操作以脫減孢子液中的菌絲，也需要離心沉淀操作脫除孢子液中的培養基以及培養代謝產物等，這些操作過程均存在較大的污染風險，另外，需要將孢子液的孢子濃度調整到合適的范圍，因此需要反復的調配與取樣到計數板或載玻片，還要轉到生物顯微鏡下觀察計數，比較繁瑣。

發明內容

本發明的目的是，提供一種香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種香蕉枯萎病菌分生孢子的干式移植方法，從產孢菌落上粘附孢子并直接移植及散布到觀測平板上，孢子的干式移植操作步驟如下：

1.分生孢子的培養準備

用馬鈴薯蔗糖瓊脂培養基，進行香蕉枯萎病菌的產孢培養，直至產孢菌落上形成密集的分生孢子。

2.移孢棉簽的無菌處理

先用記號筆在普通棉簽上點畫標記，再將該棉簽放入培養皿內，常規高壓滅菌并烘干后備用。

3.觀測瓊脂平板的準備

用常規瓊脂培養基制備孢子觀測平板，用滅菌刀片將培養皿倒制的瓊脂平板切成長條狀，并將該瓊脂條挑轉到滅菌載玻片上，作為分生孢子觀測平板。

4.密集孢子的分散

取步驟2準備的滅菌棉簽，將棉簽端部球面碰觸步驟1準備的產孢菌落，接觸菌落的球面粘附菌落上密集的孢子；然后轉移到空白瓊脂平板上抹涂和點印，稀散棉簽球面上吸附的密集孢子。

5.分生孢子的移印

將步驟4稀散孢子后的棉簽球面，在步驟3準備的孢子觀測瓊脂平板面的不同位置作有序連續點印，得到孢子數量一致、且孢子分散性良好的孢子印跡。

6.分生孢子的培養處理