[發(fā)明專利]一種檢測溶酶體極性變化的熒光探針及其制備方法和應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110686566.4
• 申請日: 2021-06-21
• 公開（公告）號: CN113429346A
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 強濤濤;王寶帥;梁天宇;胡偉
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C07D221/14
• 分類號: C07D221/14;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 李紅霖

本發(fā)明公開了一種檢測溶酶體極性變化的熒光探針及其制備方法和應用，屬于分析化學技術(shù)領(lǐng)域。所述檢測溶酶體極性變化的熒光探針的結(jié)構(gòu)式為：所述制備方法先通過4?溴?1,8?萘二甲酸酐與N?(2?氨基乙基)嗎啉的取代反應制得Nap?Br，再繼續(xù)與4?乙炔基苯胺進行縮合反應制得。所述檢測溶酶體極性變化的熒光探針能夠檢測溶酶體極性改變，具有良好的光學穩(wěn)定性以及對極性的特異性響應；能夠有效應用于檢測溶酶體極性變化，同時解決了特定細胞器靶向性差和生物樣品損傷大的問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測溶酶體極性變化的熒光探針及其制備方法和應用。

背景技術(shù)

溶酶體極性屬于細胞微環(huán)境的一種，在病理學研究中起到非常重要的作用，溶酶體是細胞內(nèi)物質(zhì)的回收處理中心，在細胞自噬，代謝，能量循環(huán)，細胞膜修復等方面發(fā)揮著重要的作用。溶酶體極性的改變往往會影響細胞內(nèi)各種新陳代謝的進行。溶酶體的極性在調(diào)節(jié)生物生理過程中起到了重要的作用，極性的異常與許多疾病有關(guān)。所以檢測溶酶體內(nèi)極性的改變對于研究細胞自噬，以及生命體病理分析具有重要的意義。

熒光探針技術(shù)由于具有實時監(jiān)測，高效準確，靈敏度高等優(yōu)點而成為檢測生物分子以及生物體微環(huán)境的重要檢測手段。雙光子探針相較于單光子探針，在組織穿深度高，生物樣品損傷小等方面具有獨特的優(yōu)勢，因而被應用于生物體成像中。所以，發(fā)展一種新型的雙光子熒光探針對于檢測溶酶體極性具有重要意義。

現(xiàn)階段的極性探針由于缺少靶向性和雙光子特性，無法對自噬發(fā)生的重要細胞器進行定位，進入細胞體內(nèi)后往往均勻擴散在細胞器中，缺少靶向性。同時，現(xiàn)階段的單光子探針存在激發(fā)波長短的特點，對于樣品的損傷較大，無法實現(xiàn)生物樣品的長時間觀察，因此也無法進一步探究細胞自噬與炎癥的關(guān)系。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測溶酶體極性變化的熒光探針及其制備方法和應用，解決了特定細胞器靶向性差和生物樣品損傷大的問題，為探究細胞內(nèi)炎癥與自噬的發(fā)生提供了一個合理工具。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

本發(fā)明公開了一種檢測溶酶體極性變化的熒光探針，其結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明公開了上述檢測溶酶體極性變化的熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

(1)將4-溴-1,8-萘二甲酸酐與N-(2-氨基乙基)嗎啉均勻分散于溶劑A中進行取代反應，取代反應結(jié)束后將所得取代產(chǎn)物混合物經(jīng)分離純化后，得到Nap-Br；

(2)將CuI、Pd(PPh₃)₂Cl₂、步驟(1)所得Nap-Br和4-乙炔基苯胺均勻分散于溶劑B中，在CuI環(huán)境中、以Pd(PPh₃)₂Cl₂為催化劑進行縮合反應，縮合反應結(jié)束后將所得縮合產(chǎn)物混合物經(jīng)分離純化后，得到所述檢測溶酶體極性變化的熒光探針。

優(yōu)選地，步驟(1)中，4-溴-1,8-萘二甲酸酐與N-(2-氨基乙基)嗎啉的摩爾比為1.0:1.0～1.5。

進一步優(yōu)選地，4-溴-1,8-萘二甲酸酐與N-(2-氨基乙基)嗎啉的摩爾比為1.0:1.3。

優(yōu)選地，步驟(2)中，Nap-Br與4-乙炔基苯胺的摩爾比為1.0:1.0～1.5。

進一步優(yōu)選地，所述Nap-Br與4-乙炔基苯胺的摩爾比為1.0:1.1。

優(yōu)選地，步驟(2)中CuI、Pd(PPh₃)₂Cl₂與步驟(1)所得Nap-Br的摩爾比為0.003:0.4:1.0。

優(yōu)選地，步驟(1)中，取代反應的溫度為40℃。