[發明專利]一種耐熱右旋糖酐蔗糖酶突變體及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110686273.6
• 申請日: 2021-06-22
• 公開（公告）號: CN113201513B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 韋旭欽;彭小玉;吳睿;阮恒;李廣;曹志強;王則奮;胡雪玲;李略;韋志明;吳建璋
• 申請（專利權）人: 廣西產研院生物制造技術研究所有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/18;C12P19/08
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一種耐熱右旋糖酐蔗糖酶突變體及其制備方法與應用，其特征在于，該突變體是截取檸檬明串珠菌(Leuconostoc?citreum)右旋糖酐蔗糖酶DsrV的37?1430區間氨基酸肽段并經結構優化得到的新突變體，其最適溫度為63℃，在58?68℃高溫條件下有良好的熱穩定性。該突變體可催化蔗糖生成微分子量的右旋糖酐，其催化過程具有轉化液粘稠度低，無雜菌生長，能耗低，操作簡單的特點。該突變體適合工業化應用，更有利于降低微分子量右旋糖酐的生產成本。

技術領域

本發明屬于基因工程和分子酶工程技術領域，具體涉及一種耐熱右旋糖酐蔗糖酶突變體及其制備方法，以及該突變體在一步法催化蔗糖生成微分子量右旋糖酐及其右旋糖酐衍生品中的應用。

背景技術

右旋糖酐(Dextran)，又稱右旋糖苷、右聚糖、葡聚糖、多聚葡萄糖，是由右旋糖酐蔗糖酶(Dextransucrase，DSR，EC2.4.5.1)的催化作用，將蔗糖分子中的D-葡萄糖基轉移到受體分子上，形成一種由若干葡萄糖基連接而成的高分子多糖聚合物，同時伴有果糖的生成。右旋糖酐主鏈以α-D-1，6糖苷鍵連接，側鏈分支點是由α-D-1，3和α-D-1，2連接，是最早發現的微生物多糖，也是較早作為代血漿應用的微生物多糖。右旋糖酐由于質地疏松柔軟，具有安全、無毒、無臭、無味、黏性高、生物相容性好、水溶性好及持水性強等多種優點，廣泛應用于制藥、食品、化工、農牧業和色譜分析等多個領域。其中，低分子量(分子量為10000-20000Da)、微分子量的右旋糖酐(分子量為10000Da以下)具有更大的經濟價值和更廣闊的市場前景，低分子量的右旋糖酐與鐵形成復合物，治療嚴重貧血；微分子量的硫酸葡聚糖則具有抗病毒特性。微分子量的右旋糖酐也可以改善微循環，預防或消除血管內紅細胞聚集和血栓形成，有擴充血容量及滲透利尿作用，可用于治療急性失血性休克、心肌梗塞、腦血栓、周圍血管病及防止彌散性血管內凝血等功效，在臨床醫學上有廣泛的應用。低、微分子量右旋糖酐還可以進一步形成一系列用途極為廣泛的衍生物。右旋糖酐衍生物通常是以低、微分子量的右旋糖酐為主要載體，與其它金屬化合物進行絡合反應，生成右旋糖酐金屬絡合物，是人體和禽畜類重要的微量元素補充劑，或具有多種藥理活性，有廣泛的應用前景，主要有右旋糖酐鐵、右旋糖酐鋅、右旋糖酐銅和右旋糖酐鈣等。不同類型的右旋糖酐金屬絡合物的制備過程大同小異，通常先將低、微分子量的右旋糖酐在弱堿性條件下進行活化，再分別與不同的金屬化合物進行絡合反應，經過產物分離、純化和精制，即得到不同用途的成品。因此，高效制備低分子、微分子右旋糖酐已備受相關研究者的關注。