[發(fā)明專利]一種具有促生長(zhǎng)及防腐作用的枯草芽孢桿菌及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110684645.1
• 申請(qǐng)日: 2021-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN113528377B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 單寶龍;胡著然;王麗榮;冉新炎;陳丹丹;李圓圓;陶寧;韓廣泉;齊素敏;樊梅娜;申小冉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東碧藍(lán)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01N63/22;A01P1/00;A01P3/00;A01P21/00;A23L3/3571;C12R1/125
• 代理公司: 北京匯信合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335
• 代理人: 夏靜潔

本發(fā)明公開了一種具有促生長(zhǎng)及防腐作用的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)NBL?B12005；該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為：CCTCC M 2021642。本發(fā)明還提供了枯草芽孢桿菌在生物促生長(zhǎng)劑、生物防腐劑中的應(yīng)用；本發(fā)明還提供了一種生物抑菌劑，該生物抑菌劑含有上述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)NBL?B12005和/或所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)NBL?B12005的培養(yǎng)物。該菌株針對(duì)引發(fā)果實(shí)腐爛的多種致腐菌、致病菌均具有良好的拮抗作用，菌懸液及發(fā)酵上清液均具有較好的抑制效果，安全性高，具有良好的抑菌、促生長(zhǎng)、防腐的功效。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物保鮮技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有促生長(zhǎng)及防腐作用的枯草芽孢桿菌及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前市場(chǎng)上果蔬的保鮮主要以物理方法(如冷藏、氣調(diào)、紫外照射等)和使用各類廣譜殺菌劑為主，多用于采摘后；但這些方法往往伴隨著資金高投入、能源高消耗、農(nóng)藥高殘留等諸多問題，用微生物進(jìn)行果實(shí)病害的生物防治不損害人體健康，不造成環(huán)境污染，而且不易引起植物的抗藥性，因此，防病效果明顯、環(huán)境友好型且成本較低的生物防治技術(shù)成為國(guó)內(nèi)外果蔬采后貯藏保鮮的研究熱點(diǎn)。

針對(duì)目前果蔬保鮮技術(shù)存在的問題，微生物菌劑可以作為在存貯過程中保護(hù)農(nóng)產(chǎn)品的替代手段，但是，研究發(fā)現(xiàn)，拮抗菌具有效果不穩(wěn)定，防腐譜較窄等缺點(diǎn)，且拮抗菌的拮抗機(jī)理是通過營(yíng)養(yǎng)與生存空間競(jìng)爭(zhēng)或分泌活性抗菌物質(zhì)單方面相關(guān)，如：拮抗酵母YT-2的拮抗機(jī)理只是通過與致病菌的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生存空間的競(jìng)爭(zhēng)作用。因此，尋找活性生物防腐劑的策略應(yīng)該是不僅要著手與可以定殖在水果受損區(qū)域的微生物，而且需要在廣泛的溫度條件下，能對(duì)營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)與病原菌表現(xiàn)出抗性與競(jìng)爭(zhēng)作用的微生物。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述研究背景，發(fā)明人提供一種一種具有促生長(zhǎng)及防腐作用的枯草芽孢桿菌，該枯草芽孢桿菌通過營(yíng)養(yǎng)與生存空間競(jìng)爭(zhēng)和分泌活性抗菌物質(zhì)同時(shí)起到抑制致病菌和腐敗菌的作用，能夠減少果實(shí)的發(fā)病及腐爛率，在果實(shí)防腐保鮮方面具有良好的應(yīng)用價(jià)值。

為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)效果，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種具有促生長(zhǎng)及防腐作用的枯草芽孢桿菌，該菌株分離自山東省肥城市中央桃行的桃果實(shí)樣品，其菌落形態(tài)滿足芽孢桿菌特征，經(jīng)基因組測(cè)序比對(duì)，與其他已知同屬的芽孢桿菌的16S rDNA序列有98％的相似性，通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間MALDI-TOF MS質(zhì)譜分析，本發(fā)明菌株與Bacillus subtilis準(zhǔn)確率達(dá)2.201。綜合形態(tài)特征、16S rDNA基因序列結(jié)果和MALDI-TOF MS質(zhì)譜分析確定，本發(fā)明菌株屬于枯草芽孢桿菌，命名為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)NBL-B12005。該菌株已于2021年05月31日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，簡(jiǎn)稱CCTCC，保藏地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)，其生物保藏號(hào)為：CCTCC M 2021642。

進(jìn)一步的，所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)NBL-B12005菌體特征為：革蘭氏陽(yáng)性直桿，大小為0.6×1.0-1.4微米，單個(gè)或成對(duì)分組，形成內(nèi)生孢子；芽孢是橢圓形的，具有中心或亞頂部定位；孢子囊沒有腫脹。

菌落特征為：LB平板固體培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)24h后形成淺米色的圓形菌落，邊緣較規(guī)則，直徑2-4mm，無光澤，中心略有同心圓褶皺突起，質(zhì)地粘稠。

進(jìn)一步的，所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)NBL-B12005的生理生化特征如下：

能水解淀粉、糖蜜，不能利用木糖、阿拉伯糖及甘露醇，能還原硝酸鹽，在7％氯化鈉和 pH5.7條件下可以生長(zhǎng)。

進(jìn)一步的，所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)NBL-B12005菌株通過蘿卜種子植物毒性試驗(yàn)和獸醫(yī)毒理學(xué)研究，結(jié)果表明，本發(fā)明菌株無致病性，無毒，可用于微生物生產(chǎn)。