[發(fā)明專利]一種NKG2A納米抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110683827.7
• 申請(qǐng)日: 2021-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN113278073B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范瑞文;郭湘;賈瓊;李佳敏;秦蓉芬;遲志端
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00;G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明涉及一種NKG2A納米抗體及其應(yīng)用，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述NKG2A納米抗體的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。采用本發(fā)明提供的NKG2A納米抗體能夠特異性結(jié)合NKG2A蛋白，靈敏度為0.532μg/ml，可用于免疫組織化學(xué)和WesternBlotting法檢測組織中NKG2A的表達(dá)，為NKG2A基因功能的研究提供方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種NKG2A納米抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

駱駝科動(dòng)物(羊駝、駱駝)和軟骨魚體內(nèi)的一種天然缺失重鏈但仍然具有生物活性的特異性抗體稱單域抗體，單域抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)(VHH)具有獨(dú)立的抗原識(shí)別能力，獨(dú)立表達(dá)的VHH又被稱為納米抗體。與傳統(tǒng)的四聯(lián)體抗體相比，納米抗體的主要特點(diǎn)有：分子量小，結(jié)構(gòu)簡單，理化性質(zhì)穩(wěn)定等。納米抗體的優(yōu)良特性使其在多種方面具有優(yōu)勢：在抗體進(jìn)入機(jī)體方面，納米抗體能夠穿過動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的一些保護(hù)性屏障進(jìn)入發(fā)病部位發(fā)揮作用，如血腦屏障、血睪屏障等；在抗原抗體結(jié)合方面，能夠結(jié)合一些隱蔽的抗原表位，特別適用于比較難得到抗體的靶點(diǎn)，如GPCR、離子通道和酶活中心等；在降低生產(chǎn)成本方面，納米抗體結(jié)構(gòu)簡單易于體外表達(dá)，同時(shí)體外表達(dá)不易產(chǎn)生包涵體，生產(chǎn)工藝簡單。

NKG2A是NKG2家族中的“抑制性”成員，主要表達(dá)在CD56hiNK細(xì)胞、NKT細(xì)胞和CD8+αβT細(xì)胞亞群中。非經(jīng)典MHC?I類分子HLA-E是NKG2A-CD94的主要配體，表達(dá)水平比經(jīng)典MHC?I類分子低約25倍，在大多數(shù)正常組織中都有表達(dá)，NKG2A與HLA-E的相互作用能抑制NK細(xì)胞和T細(xì)胞的激活。NKG2A抑制劑能促進(jìn)T細(xì)胞和NK細(xì)胞的抗腫瘤能力，有望和現(xiàn)有的免疫療法互補(bǔ)，更好地治療癌癥患者。同時(shí)，更多腫瘤相關(guān)免疫檢查點(diǎn)的開發(fā)對(duì)于給癌癥患者提供選擇尤為重要，而NKG2A是多種腫瘤如黑素瘤的免疫檢查點(diǎn)。目前，還沒有特異性結(jié)合NKG2A蛋白的納米抗體的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種NKG2A納米抗體及其應(yīng)用。本發(fā)明所述NKG2A納米抗體固有的分子量小、理化特征穩(wěn)定、親和力高和結(jié)構(gòu)簡單易于重組表達(dá)制備，能夠穿過血腦屏障，在疾病的診斷與治療中有較大的應(yīng)用前景。采用本發(fā)明提供的NKG2A納米抗體能夠特異性結(jié)合NKG2A蛋白，靈敏度為0.532μg/ml，可用于免疫組織化學(xué)和Western?Blotting法檢測組織中NKG2A的表達(dá)。

本發(fā)明提供了一種NKG2A納米抗體，所述NKG2A納米抗體的氨基酸序列如SEQ?IDNO.1所示。

優(yōu)選的是，編碼所述NKG2A納米抗體的基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述NKG2A納米抗體在制備結(jié)合NKG2A蛋白的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述的NKG2A納米抗體在制備結(jié)合NKG2A蛋白的免疫組織化學(xué)試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述的NKG2A納米抗體在制備結(jié)合NKG2A蛋白的WesternBlotting檢測試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種NKG2A納米抗體及其應(yīng)用。利用噬菌體展示技術(shù)進(jìn)行淘篩，噬菌體展示技術(shù)能將表達(dá)的外源多肽或蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌體的表面，進(jìn)而通過親和富集法篩選表達(dá)有特異性蛋白質(zhì)的噬菌體。本發(fā)明采用噬菌體展示實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)的NKG2A納米抗體能夠特異性結(jié)合NKG2A蛋白，對(duì)NKG2A蛋白的靈敏度為0.532μg/ml，可用于免疫組織化學(xué)和Western?Blotting法檢測組織中NKG2A的表達(dá)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明提供的Western?Blotting對(duì)純化的NKG2A-VHH-His檢測；

圖2為本發(fā)明提供的考馬斯亮藍(lán)檢測純化的NKG2A-VHH檢測；