[發(fā)明專利]美國白蛾不同性別成蟲熒光定量內(nèi)參基因及其引物和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110683460.9
• 申請(qǐng)日: 2021-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN113774065A
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳文霞;黃志寬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京市園林和林業(yè)科學(xué)研究院（南京市園林綠化指導(dǎo)站）
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12Q1/6879;C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 南京申云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本發(fā)明公開了美國白蛾不同性別成蟲的熒光定量內(nèi)參基因及其引物和應(yīng)用，屬于林業(yè)昆蟲分子生物學(xué)領(lǐng)域。該熒光定量內(nèi)參基因?yàn)镽PL13和RPS15基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本發(fā)明通過美國白蛾的轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)庫，選擇了常用作內(nèi)參基因的8個(gè)候選內(nèi)參基因，通過5種算法評(píng)估候選內(nèi)參基因的穩(wěn)定性，獲得了美國白蛾不同性別成蟲的熒光定量內(nèi)參基因，并設(shè)計(jì)了內(nèi)參基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物，該引物特異性強(qiáng)，擴(kuò)增效率高。本申請(qǐng)?zhí)钛a(bǔ)了美國白蛾不同性別成蟲下沒有合適內(nèi)參基因的現(xiàn)狀，為美國白蛾不同性別實(shí)驗(yàn)條件下的相關(guān)功能基因的表達(dá)定量提供了可靠的分析依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于林業(yè)昆蟲分子生物學(xué)領(lǐng)域。具體涉及美國白蛾不同性別成蟲熒光定量內(nèi)參基因及其引物和應(yīng)用。

背景技術(shù)

美國白蛾(Hyphantria cunea(Drury))屬屬鱗翅目Lepidortera，燈蛾科Arctiidae，是世界性檢疫害蟲，被我國列入首批外來入侵物種之一。寄主廣泛，具有食性雜、傳播快、危害猖獗等特點(diǎn)。其主要危害果樹、行道樹和觀賞樹木，尤以闊葉樹為重，包括糖槭、桑、榆、臭椿、花曲柳、山楂、杏、法國梧桐等。以取食葉片為害，嚴(yán)重影響植物的正常生長果蔬產(chǎn)量和質(zhì)量等。同時(shí)對(duì)園林樹木、經(jīng)濟(jì)林、農(nóng)田防護(hù)林等造成嚴(yán)重的危害，以及對(duì)城市環(huán)境綠化和美化、經(jīng)濟(jì)發(fā)展、生態(tài)人文景觀等發(fā)展具有巨大的影響。為了能夠防治和應(yīng)對(duì)這種世界性檢疫害蟲，就需要對(duì)美國白蛾進(jìn)行研究，了解其生物學(xué)特性以及生活習(xí)性。

實(shí)時(shí)熒光定量(Reverse transcription quantitative polymerase chainreaction，RT-qPCR)是功能基因表達(dá)量的一種精確的定量方法，但它依賴于合適的內(nèi)參基因?qū)δ芑虻南鄬?duì)表達(dá)定量進(jìn)行數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化。內(nèi)參基因必須在特定的實(shí)驗(yàn)條件下穩(wěn)定表達(dá)。美國白蛾雌、雄成蟲之間存在明顯的生物學(xué)差異。因此，利用實(shí)時(shí)熒光定量方法探究美國白蛾不同性別成蟲下功能基因的差異表達(dá)分析，就需要穩(wěn)定可靠的內(nèi)參基因。因此，有必要對(duì)該害蟲不同性別成蟲下的內(nèi)參基因穩(wěn)定性進(jìn)行篩選，否則無法對(duì)該害蟲不同性別成蟲功能基因的相對(duì)表達(dá)定量進(jìn)行研究。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供不同性別成蟲的熒光定量內(nèi)參基因，滿足實(shí)時(shí)熒光定量分析美國白蛾轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平的要求，為不同性別成蟲下的相關(guān)功能基因的表達(dá)定量提供可靠的分析依據(jù)；本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題是提供美國白蛾不同性別成蟲的熒光定量內(nèi)參基因的引物；本發(fā)明所要解決的再一技術(shù)問題是提供上述基因及其引物在美國白蛾不同性別成蟲熒光定量中的應(yīng)用。

為了解決上述問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

美國白蛾不同性別成蟲的熒光定量內(nèi)參基因，為RPL13和RPS15，其中，RPL13基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，RPS15基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的美國白蛾不同性別成蟲的熒光定量內(nèi)參基因的引物，RPS13基因的引物序列如下：

RPL13正向引物：5′-TCCATTAAGGCCGGTTGTCC-3′；

RPL13反向引物：5′-AGGATCCACTGCAATGCCAA-3′。

所述的美國白蛾不同性別成蟲的熒光定量內(nèi)參基因的引物，RPS15基因的引物序列如下：

RPS15正向引物：5′-GCGTCACTCTCAAGATCAGC-3′；

RPS15反向引物：5′-ATGGTGCAGATCCTCCAGTC-3′。

上述內(nèi)參基因在美國白蛾不同性別成蟲熒光定量中的應(yīng)用。

RPL13基因的引物序列在美國白蛾不同性別成蟲熒光定量中的應(yīng)用。

RPS15基因的引物序列在美國白蛾不同性別成蟲熒光定量中的應(yīng)用。