[發明專利]家蠶微孢子蟲milRNAs及其應用

有效

• 申請號: 202110682610.4
• 申請日: 2021-06-18
• 公開（公告）號: CN113403312B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 董戰旗;潘敏慧;鄭寧;胡叢武;魯成;陳鵬
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/7105;A61K45/00;A61P33/02
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

本發明公開了家蠶微孢子蟲milRNAs及其應用，研究發現milRNA?4、milRNA?8、milRNA?10和milRNA?12對微孢子蟲的增殖有促進作用，milRNA?1、milRNA?3和milRNA?11對微孢子蟲的增殖有抑制作用，其中milRNA?8對微孢子蟲的增殖促進作用最明顯，因此可以用于調控微孢子蟲的增殖。研究還發現milRNAs作用靶基因為BmPEX16，過表達家蠶微孢子蟲拷貝數和NbPTP2的蛋白表達量均下調，表明在過表達BmPEX16后，抑制了家蠶微孢子蟲的增殖；敲除BmPEX16后，促進了家蠶微孢子蟲的增殖，因此可以通過調控BmPEX16基因的表達調控家蠶微孢子蟲的增殖，為解析家蠶微孢子蟲的防控提供了新的思路。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及家蠶微孢子蟲milRNAs，還涉及milRNAs的應用。

背景技術

miRNA是非編碼RNA中研究最為清楚的一類內源性非編碼的小RNA，長度大約為22nt，在進化上高度保守。到目前為止，已經有大約3萬個miRNAs在動、植物和病毒中被發現。miRNA通過其作用機制能有效的對靶基因進行調控，它是細胞生長、分化以及凋亡等眾多生命活動的關鍵調節劑，且與各種疾病的致病機理有密切關聯。但是，仍有許多重要的miRNAs還處于未知，迫切需要對miRNA的表達特征和機制進行深入研究，隨著對miRNA的研究，不但有助于對細胞繁殖、分化、凋亡以及代謝等生命過程進行全面的了解，尤其在某些難以攻克的疾病方面也具有重要的意義。

隨著科學家們對動植物中miRNA機制的深入研究，2010年，Lee等首次在粗糙脈孢菌中鑒別出一種與動植miRNA共同特征類似的小RNA(microRNA-like，milRNA)。milRNA作為一類非編碼單鏈RNA，其長度約19-25個堿基，主要參與真菌的應激反應、形態調控以及多種生理過程，其不僅可以誘導寄主的某些基因沉默，還可抑制寄主的免疫反應。據目前研究表明，milRNAs在真菌的生長、發育乃至生殖和毒力調控等方面都具有重要的意義。

微孢子蟲是一類典型的專性細胞內寄生的真菌類病原微生物。由于其獨特的侵染方式，微孢子蟲被認為是自然界最成功的寄生蟲。微孢子蟲的寄主范圍非常廣泛，它不僅是經濟類昆蟲(家蠶、蜜蜂)和魚類等的常見病原，而且還可感染免疫缺陷類的人類。最初，對微孢子蟲的調控研究主要集中在蛋白水平上。近些年，隨著對微孢子蟲基因學和轉錄組學的深入研究，對微孢子蟲的研究也逐漸拓展到核酸層面。但是目前，對家蠶微孢子蟲milRNAs的研究還相對薄弱。已有大量的非編碼RNA在人、小鼠和果蠅等模式生物中被鑒定出來，但真菌非編碼RNA研究相對較為滯后?，F發現東方蜜蜂微孢子蟲可通過調節milRNA的表達水平對細胞凋亡抑制因子、極管蛋白和孢壁蛋白等毒力因子和己糖激酶、ABC轉運蛋白和ATP/ADP移位酶等侵染因子進行調控，維持相關毒力因子的高表達，從而適應宿主細胞并促進自身增殖與侵染，也可通過lncRNA順式調控上下游基因的表達或作為ceRNA吸附milRNA影響靶基因的表達，從而參與調控微孢子蟲的物質和能量代謝。此外，研究表明，微孢子蟲非編碼RNA可能參與宿主細胞的增殖、凋亡和免疫過程，在病原與宿主的互作過程中發揮著重要作用，但是對微孢子蟲的非編碼RNA的調控機制還尚不清楚。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種家蠶微孢子蟲milRNAs；本發明的目的之二在于提供所述家蠶微孢子蟲milRNAs的抑制劑在制備抑制微孢子蟲增殖中的應用；本發明的目的之三在于提供過表達所述家蠶微孢子蟲milRNAs的試劑在抑制靶基因BmPEX16表達中的應用；本發明的目的之四在于提供過表達BmPEX16靶基因的試劑在制備抑制微孢子蟲增殖的藥物中的應用；本發明的目的之五在于提供抑制或敲除BmPEX16靶基因的試劑在制備促進微孢子蟲增殖的藥物中的應用。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：