[發(fā)明專利]一種針對表位點(diǎn)為SSCSSCPLSK的TCR所設(shè)計(jì)的引物及其應(yīng)用

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• 申請日: 2021-06-19
• 公開（公告）號: CN113308465A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張立峰;楊宏波;孟錦
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東天科雅生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C07K14/725
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11732
• 代理人: 王燦;周新楣

本發(fā)明涉及質(zhì)粒克隆技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種針對表位點(diǎn)為SSCSSCPLSK的TCR所設(shè)計(jì)的引物及其應(yīng)用，所述引物對包括L11?3位點(diǎn)的引物對、L11?6位點(diǎn)的引物對和L11?15位點(diǎn)的引物對中的一種、兩種或三種。本發(fā)明的引物對針對分型為HLAA11、表位點(diǎn)為SSCSSCPLSK的患者體內(nèi)EBV病毒抗原肽段的TCR所設(shè)計(jì)，能夠?qū)崿F(xiàn)特定質(zhì)粒的克隆。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及質(zhì)粒克隆技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種針對表位點(diǎn)為SSCSSCPLSK的TCR所設(shè)計(jì)的引物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

載體是一種運(yùn)載體(vehicle)，通過其可將多核苷酸序列(例如，外源基因)引入至宿主細(xì)胞中，以便轉(zhuǎn)化宿主并促進(jìn)引入的序列的表達(dá)(例如轉(zhuǎn)錄和翻譯)。載體包括質(zhì)粒、噬菌體、病毒等。載體的最普遍的類型是質(zhì)粒，其是指閉合的環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)，其中可連接含有目標(biāo)基因的另外的DNA段。載體的另一種類型為病毒載體，其中將待運(yùn)輸?shù)暮怂針?gòu)建體連接至病毒基因組中。病毒載體可在它們被引入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制、或可將它們自身整合至宿主細(xì)胞的基因組中，從而與宿主基因組一起復(fù)制。此外，某些載體可指導(dǎo)與其可操作連接的基因的表達(dá)。

要將某一目標(biāo)基因片段克隆進(jìn)質(zhì)粒載體，必須有與目標(biāo)基因片段序列相匹配的引物。我公司克隆到了3條針對免疫分型為HLA A11的病人體內(nèi)的EBV病毒蛋白的SSCSSCPLSK表位點(diǎn)的TCR，并對這3條TCR的基因序列申請了專利保護(hù)。但是，現(xiàn)有技術(shù)中尚沒有將此3條TCR的基因序列克隆進(jìn)質(zhì)粒載體的引物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種引物對，用于質(zhì)粒克隆。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案。

本發(fā)明提供了一種引物對，所述引物對包括L11-3位點(diǎn)的引物對、L11-6位點(diǎn)的引物對和L11-15位點(diǎn)的引物對中的一種、兩種或三種。

作為優(yōu)選，所述引物對針對分型為HLA A11、表位點(diǎn)為SSCSSCPLSK的患者體內(nèi)EBV病毒抗原肽段的TCR所設(shè)計(jì)。

作為優(yōu)選，所述L11-3位點(diǎn)的引物對的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

作為優(yōu)選，所述L11-6位點(diǎn)的引物對的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

作為優(yōu)選，所述L11-15位點(diǎn)的引物對的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

本發(fā)明還提供了所述的引物對在質(zhì)粒克隆中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種針對表位點(diǎn)為SSCSSCPLSK的TCR所設(shè)計(jì)的引物及其應(yīng)用，所述引物對包括L11-3位點(diǎn)的引物對、L11-6位點(diǎn)的引物對和L11-15位點(diǎn)的引物對中的一種、兩種或三種。本發(fā)明的引物對針對分型為HLA A11、表位點(diǎn)為SSCSSCPLSK的患者體內(nèi)EBV病毒抗原肽段的TCR所設(shè)計(jì)，能夠?qū)崿F(xiàn)特定質(zhì)粒的克隆。

附圖說明

圖1為TCRPCR擴(kuò)增后膠回收電泳結(jié)果；

圖2為骨架載體質(zhì)粒圖譜；

圖3為TCR與載體重組質(zhì)粒酶切電泳結(jié)果；

圖4為TCR與載體重組質(zhì)粒測序峰圖；

圖5為TCR轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞，流式檢測轉(zhuǎn)染效率；

圖6為TCR轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞后，功能驗(yàn)證流式檢測INFg；

圖7為TCR轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞后，功能驗(yàn)證流式檢測INFg。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種引物對，所述引物對包括L11-3位點(diǎn)的引物對、L11-6位點(diǎn)的引物對和L11-15位點(diǎn)的引物對中的一種、兩種或三種。