[發明專利]一種超敏ECL發光液試劑及其使用方法

在審

• 申請號: 202110681650.7
• 申請日: 2021-06-19
• 公開（公告）號: CN113567679A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 張煜
• 申請（專利權）人: 百美特（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/573
• 代理公司: 上海中外企專利代理事務所(特殊普通合伙) 31387
• 代理人: 孫益青

本發明公開了一種超敏ECL發光液試劑及其使用方法，其中，包含試劑液A、試劑液B，試劑液A包含三羥甲基氨基甲烷、魯米諾、對羥基肉桂酸，試劑液B包含三羥甲基氨基甲烷、過氧化氫，使用時將試劑液A與試劑液B按比例混合，試劑A中的三羥甲基氨基甲烷的質量體積比為12g/L，魯米諾的質量體積比為100mg/L，對羥基肉桂酸的質量體積比為0.21g/L；試劑B中的三羥甲基氨基甲烷的質量體積比為12g/L，過氧化氫的體積比為750μL/L；靈敏度較高，能夠將蛋白含量為納克級別的蛋白顯出條帶；無需發光顯色前孵育；顯色固相載體背景較為干凈，無其它雜點，解決一些蛋白表達量較低或抗體與蛋白結合能力較弱的蛋白顯色問題。

技術領域

本發明涉及分子生物領域，具體涉及一種超敏ECL發光液試劑及其使用方法。

背景技術

Western Blot實驗即蛋白質印跡實驗，它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法，其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過程的細胞或生物組織樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息的一種方法。該方法可分為電泳、轉印、酶免疫檢測3個階段，采用PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品被轉移到固相載體(例如硝酸纖維素膜)上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能夠保持電泳分離的多肽類型及其生物活性不變，以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶標記的第二抗體起反應，經過底物顯色以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分；

目前在Western Blot實驗中一般采用的發光顯色液為ECL發光液，然而對于一些表達量較少的蛋白，其靈敏度相對較低或幾乎沒用，導致一些蛋白含量較低的蛋白無法被顯色出來。而目前對于這一類的蛋白的顯色問題還未得到解決。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種超敏ECL發光液試劑，還提供一種超敏ECL發光液試劑的使用方法，顯色速度較快，能夠節省大量的時間；靈敏度較高，能夠將蛋白含量為納克級別的蛋白顯出條帶；無需發光顯色前孵育；顯色固相載體背景較為干凈，無其它雜點，解決一些蛋白表達量較低或抗體與蛋白結合能力較弱的蛋白顯色問題，用以解決現有技術導致的缺陷。

為解決上述技術問題本發明提供以下的技術方案：

第一方面，一種超敏ECL發光液試劑，其中，包含試劑液A、試劑液B，所述試劑液A包含三羥甲基氨基甲烷、魯米諾、對羥基肉桂酸，試劑液B包含三羥甲基氨基甲烷、過氧化氫，使用時將所述試劑液A與所述試劑液B按比例混合。

上述的一種超敏ECL發光液試劑，其中，使用時將所述試劑液A與所述試劑液B按1:1的體積混合。

上述的一種超敏ECL發光液試劑，其中，所述試劑A中的所述三羥甲基氨基甲烷的質量體積比為12g/L，所述魯米諾的質量體積比為100mg/L，所述對羥基肉桂酸的質量體積比為0.21g/L。

上述的一種超敏ECL發光液試劑，其中，所述試劑B中的所述三羥甲基氨基甲烷的質量體積比為12g/L，所述過氧化氫的體積比為750μL/L。

上述的一種超敏ECL發光液試劑是基于一種Western Blot的超敏ECL發光液試劑，該超敏ECL發光液試劑能夠快速進行顯色，無需對固相載體進行孵育，能夠縮短Westernblot蛋白的顯色時間，同時，該超敏ECL發光液試劑顯色之后，固相載體背景較為清晰，無其他雪花點或雜背景，解決一些蛋白表達量較低或抗體與蛋白結合能力較弱的蛋白顯色問題。

第二方面，一種超敏ECL發光液試劑的使用方法，其中，包含以下步驟：

步驟1:將試劑液A與試劑液B按比例混合制成混合溶劑；

步驟2:將混合溶劑加載固相載體上，無需孵育。