[發明專利]一種黑果枸杞花青素合成相關的MYB轉錄抑制因子LrETC1及其應用

有效

• 申請號: 202110679791.5
• 申請日: 2021-06-18
• 公開（公告）號: CN113444731B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 曹有龍;唐琳;樊云芳;秦歡;安巍;李婷婷;陳曉軍;戴國禮;秦墾;尹躍;秦小雅;梁曉婕
• 申請（專利權）人: 寧夏農林科學院枸杞科學研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發明公開了一種黑果枸杞花青素合成相關的MYB轉錄抑制因子LrETC1及其應用。屬于基因工程技術領域。本發明篩選克隆到了參與花青素合成的MYB轉錄抑制因子：LrETC1，其基因cDNA共240bp，編碼79個氨基酸；通過蛋白序列數據庫分析顯示屬于R3類MYB轉錄因子。多重序列比對和進化樹分析表明其屬于AtCPC?like類轉錄抑制因子。是定位于細胞核中的沒有激活功能的轉錄因子。通過農桿菌介導的遺傳轉化獲得LrETC1轉基因擬南芥株系，與野生型相比，種子的種皮呈現出淺棕色，在高蔗糖濃度脅迫條件下的擬南芥幼苗無色素積累且相關結構基因的表達水平顯著下調。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，更具體的說是涉及一種黑果枸杞花青素合成相關的MYB轉錄抑制因子LrETC1及其應用。

背景技術

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murry.)屬茄科(Solanaceae)枸杞屬落葉多棘刺灌木，其營養豐富，藥食兼得，因其富含大量的花青素受到人們廣泛關注。花青素具有較強的抗氧化活性，不僅可以幫助植物抵御脅迫環境，而且對促進人類健康也大有脾益。

轉錄因子，也稱為反式作用因子，通常指由基因編碼的一類蛋白質，能夠與基因啟動子區域的相關順式作用元件特異性結合來激活或抑制基因的表達，從而提高植物對環境的適應性。在花青素的代謝調控中MYB轉錄因子起著重要的作用，雖然已有研究結果報道了黑果枸杞中幾個正調控花青素合成的MYB轉錄因子，但是關于抑制其花青素合成的MYB轉錄因子還未見報道。

因此，如何提供一種黑果枸杞花青素合成相關的MYB轉錄抑制因子是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種黑果枸杞花青素合成相關的MYB轉錄抑制因子LrETC1及其應用。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種黑果枸杞花青素合成相關的MYB轉錄抑制因子LrETC1，其氨基酸序列如SEQID No.2所示。

本發明還提供了一種黑果枸杞花青素合成相關的MYB轉錄抑制因子LrETC1的基因，基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本發明還提供了包含上述轉錄抑制因子LrETC1基因的重組載體。

本發明還提供了包含上述轉錄抑制因子LrETC1基因或上述重組載體的重組菌株。

本發明還提供了上述轉錄抑制因子LrETC1或上述的基因在枸杞育種中的應用。

經由上述的技術方案可知，與現有技術相比，本發明公開提供了一種黑果枸杞花青素合成相關的MYB轉錄抑制因子LrETC1及其應用，相較于現有技術通過黑果枸杞的轉錄組數據，根據注釋結果和MYB轉錄因子的表達量差異，篩選克隆到了參與花青素合成的MYB轉錄抑制因子：LrETC1，其基因cDNA共240bp，編碼79個氨基酸；通過蛋白序列數據庫分析顯示含有1個保守的MYB-DNA-binding結構域，屬于R3類MYB轉錄因子。多重序列比對和進化樹分析表明其與其他物種中與花青素合成相關的MYB轉錄抑制因子聚在一類，屬于AtCPC-like類轉錄抑制因子。

qRT-PCR分析顯示LrETC1在黑果枸杞的各個組織中均有表達，并隨著果實的成熟而表達水平逐漸升高。亞細胞定位和轉錄活性檢測實驗表明，LrETC1是定位于細胞核中的沒有激活功能的轉錄因子。

構建植物過表達載體，通過農桿菌介導的遺傳轉化獲得LrETC1轉基因擬南芥株系，與野生型相比，種子的種皮呈現出淺棕色，在高蔗糖濃度脅迫條件下的擬南芥幼苗無色素積累且相關結構基因的表達水平顯著下調。

附圖說明