[發(fā)明專利]一種炎癥檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110678903.5
• 申請日: 2021-06-18
• 公開（公告）號: CN113278075B
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬紅妙;張玲
• 申請（專利權(quán)）人: 蕪湖森愛馳生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;G01N33/577;G01N33/573;G01N33/569;G01N33/58
• 代理公司: 合肥東邦滋原專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34155
• 代理人: 楊靜

本發(fā)明公開了一種炎癥檢測試劑盒。本發(fā)明篩選獲得特異性識別艱難梭菌GDH抗原單克隆抗體，將所述單克隆抗體標(biāo)記量子點和其他抗體標(biāo)記的硝酸纖維素膜制備獲得抗體熒光量子點快速檢測試紙，同時針對艱難梭菌毒素B的DNA序列進(jìn)行分析，選取保守區(qū)設(shè)計RPA引物和探針，并制備成為相應(yīng)的檢測試紙條；將兩個檢測方法進(jìn)行組合使用，能夠進(jìn)一步提高檢測的準(zhǔn)確性，從而及早診斷，利于患者盡快治療，適于大規(guī)模推廣使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域,并且更具體地涉及一種炎癥檢測試劑盒。

背景技術(shù)

艱難梭菌(Clostridium difficile，CD)，又稱難辨梭狀芽孢桿菌或難辨梭菌，是一種可形成孢子的、厭氧的革蘭氏陽性桿菌，存在于環(huán)境、動物及人類的腸道中。1935年Holl等首次在健康新生兒大便中分離出該菌，并命名為難辨桿菌(Bacillus difficilis)，以反映其培養(yǎng)的難度之大。1978年，Larson等和Bartlett等確認(rèn)艱難梭菌是偽膜性腸炎的致病菌，且毒素的存在與致病性相關(guān)。目前，艱難梭菌已是發(fā)達(dá)國家醫(yī)院感染性腹瀉的主要病原菌。艱難梭菌侵入人體后，機體免疫系統(tǒng)與菌株毒力相互作用，其臨床表現(xiàn)可有無癥狀攜帶、輕度到重度腹瀉、結(jié)腸炎、偽膜性腸炎、腸梗阻、中毒性巨結(jié)腸和暴發(fā)性腸炎合并穿孔等，甚至危及生命。因艱難梭菌導(dǎo)致的感染或腹瀉被稱為艱難梭菌感染(Clostridiumdifficile infection,CDI)或艱難梭菌相關(guān)性腹瀉(Clostridium difficile-associateddiarrhea，CDAD)。

艱難梭菌包括兩類，產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株。其產(chǎn)毒株可產(chǎn)生以下三種毒素：毒素A(Toxigenic Clostridium difficile A，Tcd A)、毒素B(Toxigenic Clostridiumdifficile B，Tcd B)及二元毒素(binary toxin,CDT)。其中，毒素A與毒素B在艱難梭菌致病過程中影響最大，是主要致病因子。毒素A有腸毒性，以破壞腸道血管及黏膜為主，毒素B有細(xì)胞毒性，可進(jìn)入腸上皮細(xì)胞，破壞細(xì)胞骨架肌動蛋白的形成從而引發(fā)臨床癥狀。近些年大量臨床研究顯示，CDI患者可以只有毒素B的存在，當(dāng)患者毒素A陰性而毒素B陽性時，其臨床癥狀嚴(yán)重程度更高。

目前公認(rèn)的診斷CDI的“金標(biāo)準(zhǔn)”是細(xì)胞毒性試驗和產(chǎn)毒培養(yǎng)(toxigenicculture，TC)。細(xì)胞毒性試驗因操作復(fù)雜，價格昂貴且花費時間較長，不適合臨床實驗室日常開展。產(chǎn)毒培養(yǎng)是在先行培養(yǎng)得到艱難梭菌培養(yǎng)物后，通過聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerasechain reaction，PCR)擴增毒素基因以便進(jìn)一步確認(rèn)分型，優(yōu)勢在于具有較高的特異性和敏感性，但艱難梭菌培養(yǎng)困難，花費時間長且需要高精尖儀器輔助。谷氨酸脫氫酶(Glutamate dehydrogenase,GDH)是艱難梭菌表面表達(dá)的抗原性蛋白，具有較高的穩(wěn)定性和靈敏性，但是對菌株是否存在產(chǎn)毒性無區(qū)分能力，因而需要與其他方法聯(lián)合應(yīng)用。

GDH具有高敏感性，但存在假陽性及無法判斷艱難梭菌中是否攜帯有毒素基因的缺陷。而核酸檢測可精確檢測毒素基因分型，但大量樣本進(jìn)行基因檢測花費巨大，周期長，需要高精尖儀器輔助，檢測費用昂貴。因此，現(xiàn)有方法的臨床敏感性不是十分理想。

發(fā)明內(nèi)容

為了更好規(guī)避以上缺陷,為患者提供盡早、準(zhǔn)確的診斷結(jié)果，提供了一種制備簡單、成本低廉、使用方便、不需要高精尖儀器、更為準(zhǔn)確、高效的檢測試劑盒。所述試劑盒通過核酸-抗體雙重檢測方法對艱難梭菌進(jìn)行檢測，能更有效檢測艱難梭菌及其基因分型(即是否攜帶毒素B基因),從而及早診斷，利于患者盡快治療，并且避免過度治療。

本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：