[發明專利]一種快速炎癥檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202110678890.1
• 申請日: 2021-06-18
• 公開（公告）號: CN113402605B
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發明（設計）人: 馬紅妙;張玲
• 申請（專利權）人: 佛山迪安醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C12Q1/689;C12Q1/6844;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 許馳

本發明公開了一種快速炎癥檢測試劑盒。本發明篩選獲得特異性識別艱難梭菌GDH抗原單克隆抗體，將所述單克隆抗體標記量子點和其他抗體標記的硝酸纖維素膜制備獲得抗體熒光量子點快速檢測試紙，同時針對艱難梭菌毒素B的DNA序列進行分析，選取保守區設計RPA引物和探針，并制備成為相應的檢測試紙條；將兩個檢測方法進行組合使用，能夠進一步提高檢測的準確性，從而及早診斷，利于患者盡快治療，適于大規模推廣使用。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域,并且更具體地涉及一種快速炎癥檢測試劑盒。

背景技術

艱難梭菌(Clostridium difficile，CD)，又稱難辨梭狀芽孢桿菌或難辨梭菌，是一種可形成孢子的、厭氧的革蘭氏陽性桿菌，存在于環境、動物及人類的腸道中。1935年Holl等首次在健康新生兒大便中分離出該菌，并命名為難辨桿菌(Bacillus difficilis)，以反映其培養的難度之大。1978年，Larson等和Bartlett等確認艱難梭菌是偽膜性腸炎的致病菌，且毒素的存在與致病性相關。目前，艱難梭菌已是發達國家醫院感染性腹瀉的主要病原菌。艱難梭菌侵入人體后，機體免疫系統與菌株毒力相互作用，其臨床表現可有無癥狀攜帶、輕度到重度腹瀉、結腸炎、偽膜性腸炎、腸梗阻、中毒性巨結腸和暴發性腸炎合并穿孔等，甚至危及生命。因艱難梭菌導致的感染或腹瀉被稱為艱難梭菌感染(Clostridiumdifficile infection,CDI)或艱難梭菌相關性腹瀉(Clostridium difficile-associateddiarrhea，CDAD)。

艱難梭菌包括兩類，產毒株和非產毒株。其產毒株可產生以下三種毒素：毒素A(Toxigenic Clostridium difficile A，Tcd A)、毒素B(Toxigenic Clostridiumdifficile B，Tcd B)及二元毒素(binary toxin,CDT)。其中，毒素A與毒素B在艱難梭菌致病過程中影響最大，是主要致病因子。毒素A有腸毒性，以破壞腸道血管及黏膜為主，毒素B有細胞毒性，可進入腸上皮細胞，破壞細胞骨架肌動蛋白的形成從而引發臨床癥狀。近些年大量臨床研究顯示，CDI患者可以只有毒素B的存在，當患者毒素A陰性而毒素B陽性時，其臨床癥狀嚴重程度更高。

目前公認的診斷CDI的“金標準”是細胞毒性試驗和產毒培養(toxigenicculture，TC)。細胞毒性試驗因操作復雜，價格昂貴且花費時間較長，不適合臨床實驗室日常開展。產毒培養是在先行培養得到艱難梭菌培養物后，通過聚合酶鏈反應(Polymerasechain reaction，PCR)擴增毒素基因以便進一步確認分型，優勢在于具有較高的特異性和敏感性，但艱難梭菌培養困難，花費時間長且需要高精尖儀器輔助。谷氨酸脫氫酶(Glutamate dehydrogenase,GDH)是艱難梭菌表面表達的抗原性蛋白，具有較高的穩定性和靈敏性，但是對菌株是否存在產毒性無區分能力，因而需要與其他方法聯合應用。

GDH具有高敏感性，但存在假陽性及無法判斷艱難梭菌中是否攜帯有毒素基因的缺陷。而核酸檢測可精確檢測毒素基因分型，但大量樣本進行基因檢測花費巨大，周期長，需要高精尖儀器輔助，檢測費用昂貴。因此，現有方法的臨床敏感性不是十分理想。

發明內容

為了更好規避以上缺陷,為患者提供盡早、準確的診斷結果，提供了一種制備簡單、成本低廉、使用方便、不需要高精尖儀器、更為準確、高效的檢測試劑盒。所述試劑盒通過核酸-抗體雙重檢測方法對艱難梭菌進行檢測，能更有效檢測艱難梭菌及其基因分型(即是否攜帶毒素B基因),從而及早診斷，利于患者盡快治療，并且避免過度治療。

本發明提供以下技術方案：