[發(fā)明專利]NRT1.7基因表達(dá)的抑制劑在制備衣霉素吸收抑制劑中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110678271.2
• 申請(qǐng)日: 2021-06-18
• 公開（公告）號(hào): CN113549645B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭紅衛(wèi);劉傳發(fā);姜?jiǎng)P;溫興
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南方科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;C12N15/29;C12N1/21;A01H5/00;A01H6/20;A61K31/7072;A61K45/06;A61P31/04;A61P31/12
• 代理公司: 華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 張靈莉

本發(fā)明涉及一種NRT1.7基因表達(dá)的抑制劑在制備衣霉素吸收抑制劑中的應(yīng)用。NRT1.7基因是衣霉素轉(zhuǎn)運(yùn)過程中的關(guān)鍵基因，衣霉素通過NRT1.7基因表達(dá)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主內(nèi)而對(duì)宿主產(chǎn)生毒害作用，因而導(dǎo)致衣霉素在發(fā)揮抗菌、抗病毒等生物活性時(shí)副作用大，因而NRT1.7基因表達(dá)的抑制劑可以應(yīng)用于制備衣霉素抑制劑，減小衣霉素的副作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種NRT1.7基因表達(dá)的抑制劑在制備衣霉素吸收抑制劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

衣霉素(Tunicamycin)是從鏈霉菌中分離出來的核苷酸抗生素，是一種蛋白質(zhì)N-糖基化作用抑制劑，其通過抑制天門冬酰胺連接的多糖合成過程中GPT(乙酰氨基葡萄糖-1-P-轉(zhuǎn)移酶)活性來抑制N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸轉(zhuǎn)移到脂質(zhì)載體上而抑制糖蛋白的合成，從而可以抑制具有被膜(envelope，含糖蛋白)的病毒的繁殖。同時(shí)，衣霉素還可以抑制在合成細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖或胞壁酸中必需的擬脂(細(xì)菌萜醇、多聚萜醇等)中間產(chǎn)物的形成，進(jìn)而抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的形成，所以衣霉素對(duì)革蘭氏陽性菌具有抗菌性。此外，也有研究表明衣霉素還具有抗癌活性，衣霉素類似物可以用于治療結(jié)核病。

然而，在衣霉素的使用過程中發(fā)現(xiàn)，衣霉素對(duì)動(dòng)植物的毒性大，副作用大。

發(fā)明內(nèi)容

經(jīng)本申請(qǐng)的研究發(fā)現(xiàn)，NRT1.7基因是衣霉素轉(zhuǎn)運(yùn)過程中的關(guān)鍵基因，衣霉素被NRT1.7基因表達(dá)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到機(jī)體內(nèi)而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒害作用，這導(dǎo)致衣霉素在發(fā)揮抗菌、抗病毒、抗腫瘤等生物活性時(shí)副作用大。因此，基于NRT1.7基因，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环NNRT1.7基因表達(dá)的抑制劑在制備衣霉素吸收抑制劑中的應(yīng)用，以改善傳統(tǒng)的衣霉素在使用過程中副作用大的問題。

此外，還提供了一種對(duì)衣霉素不敏感的植物的制備方法、包含抑制NRT1.7基因表達(dá)的核酸片段或抑制NRT1.7基因表達(dá)產(chǎn)物活性的核酸片段的重組載體、轉(zhuǎn)化有上述重組載體的宿主菌和細(xì)胞系、以及包括衣霉素和NRT1.7基因表達(dá)的抑制劑的藥物。

一種對(duì)衣霉素不敏感的植物的制備方法，包括以下步驟：

對(duì)衣霉素敏感植物進(jìn)行處理，使得所述衣霉素敏感植物中的NRT1.7基因不表達(dá)或表達(dá)產(chǎn)物失活，制備對(duì)衣霉素不敏感的植物。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述對(duì)衣霉素敏感植物進(jìn)行處理的操作包括：敲除所述衣霉素敏感植物中的NRT1.7基因、對(duì)所述衣霉素敏感植物中的NRT1.7基因進(jìn)行D117N突變、或?qū)λ鲆旅顾孛舾兄参镏械腘RT1.7基因進(jìn)行G250R突變。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述對(duì)衣霉素敏感植物進(jìn)行處理的操作包括：采用NRT1.7基因表達(dá)的抑制劑對(duì)所述衣霉素敏感植物進(jìn)行處理。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述衣霉素敏感植物為單子葉植物。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述衣霉素敏感植物為擬南芥。

一種重組載體，所述重組載體用于沉默植物的NRT1.7基因，所述重組載體包含抑制NRT1.7基因表達(dá)的核酸片段和編碼抑制NRT1.7基因表達(dá)產(chǎn)物活性的物質(zhì)的核酸片段中的至少一種。

一種宿主菌，含有上述的重組載體。

NRT1.7基因表達(dá)的抑制劑在制備抗菌藥物或抗病毒藥物中的應(yīng)用。

一種藥物，包括衣霉素和NRT1.7基因表達(dá)的抑制劑。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1中篩選對(duì)衣霉素不敏感的擬南芥突變體的流程圖；

圖2為實(shí)施例1的野生型擬南芥、#1008擬南芥突變體、#0230擬南芥突變體和bzip28bzip60突變體在含0.05μM衣霉素的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)兩周后的植株?duì)顩r；

圖3為NRT1.7基因結(jié)構(gòu)示意圖；