[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于快速直擴(kuò)PCR檢測(cè)的病毒保存液

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110678032.7
• 申請(qǐng)日: 2021-06-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113278682A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張珉艷
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 揚(yáng)州萬(wàn)禾生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6806
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6806;C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 安徽思沃達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34220
• 代理人: 趙瑜

本發(fā)明涉及一種用于快速直擴(kuò)PCR檢測(cè)的病毒保存液，主要包含以下主要成分：溶液緩沖劑0.02?2％(w/v)；PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑0.01?0.1％(w/v)；表面活性劑0.01?0.1％(w/v)。本保存液可以有效的裂解病毒粒子，保存病毒核酸片段，抑制核酸酶活性，并且不影響PCR反應(yīng)，可用于快速直擴(kuò)PCR檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)鄰域，具體涉及一種用于快速直擴(kuò)PCR檢測(cè)的病毒保存液。

背景技術(shù)

目前對(duì)于SARS-CoV-2感染，最主要的檢測(cè)方法是核酸檢測(cè)。臨床大多采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)或反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，采用的樣本為感染者的鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液及糞便等，將這些樣本采集后，放入病毒保存液中進(jìn)行保存與運(yùn)輸。

目前傳統(tǒng)的核酸檢測(cè)需要取樣后進(jìn)行核酸提取。雖然市面上已開(kāi)發(fā)了多種基于磁珠提取核酸的儀器，一次性可以進(jìn)行96樣本的核酸提取，但至少需要15-30分鐘時(shí)間，不利于大規(guī)模快速篩查。因此，檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)需要免核酸提取，可以快速直擴(kuò)PCR檢測(cè)的病毒保存液。常規(guī)的非滅活型病毒保存液，如Hank 's液或PBS，雖然也可進(jìn)行PCR直擴(kuò)反應(yīng)，但由于含有一些PCR抑制成分等原因，其最低檢測(cè)拷貝數(shù)較高，導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度低，容易出現(xiàn)“假陰性”，將“弱陽(yáng)性”樣本漏檢。

本發(fā)明涉及的一種用于快速直擴(kuò)PCR檢測(cè)的病毒保存液，含有PCR增強(qiáng)劑成分，無(wú)需核酸提取，可以直接以取樣后的保存液為模板進(jìn)行熒光定量PCR 反應(yīng)。檢測(cè)靈敏度可達(dá)200拷貝，可用于快速核酸檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

由此可見(jiàn)，本發(fā)明提供一種用于快速直擴(kuò)PCR檢測(cè)的病毒保存液，采集樣本后可無(wú)需核酸提取，直接進(jìn)行熒光定向PCR反應(yīng)。

本發(fā)明保存液包括：溶液緩沖劑0.05-2％(w/v)；PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑0.01-0.1％(w/v)；表面活性劑0.01-0.1％(w/v)。

上述技術(shù)方案中，進(jìn)一步闡述：溶液緩沖劑為三羥甲基氨基甲烷1-2％ (w/v)、乙二胺四乙酸二鈉鹽0.05-0.1％(w/v)、氯化鈉0.5-2％(w/v)。

上述技術(shù)方案中，進(jìn)一步闡述：PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑為牛血清白蛋白 0.01-0.05％(w/v)、明膠0.01-0.05％(w/v)、硫酸銨0.01-0.1％(w/v)、海藻糖0.01-0.1％(w/v)、環(huán)糊精0.01-0.1％(w/v)中一種或幾種組合。

上述技術(shù)方案中，進(jìn)一步闡述：表面活性劑為十二烷基硫酸鈉 0.01-0.1％(w/v)、曲拉通X-1000.01-0.1％(w/v)中一種。

本發(fā)明的保存液能夠在取樣后，直接以保存液為模板進(jìn)行熒光定量PCR 反應(yīng)。檢測(cè)靈敏度可達(dá)200拷貝，可用于快速核酸檢測(cè)。本保存液兼容市場(chǎng)主流的核酸檢測(cè)試劑盒。

附圖說(shuō)明

圖1實(shí)施例1病毒保存液組和實(shí)施例2病毒保存液組的qRT-PCR效果。分別設(shè)置4種稀釋梯度(從左到右分別是10^-1、10^-2、10^-3、10^-4)和兩個(gè)重復(fù)。

具體實(shí)施方式

應(yīng)該指出，以下詳細(xì)說(shuō)明都是例示性的，旨在對(duì)本申請(qǐng)?zhí)峁┻M(jìn)一步的說(shuō)明。除非另有指明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本申請(qǐng)所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。

實(shí)施例1

保存液的制備：稱(chēng)取三羥甲基氨基甲烷12g，乙二胺四乙酸二鈉鹽 0.8g，氯化鈉1g，曲拉通X-100 1mL，牛血清白蛋白0.1g,明膠0.2g，硫酸銨 1g，溶于1L蒸餾水，配制完成后，將溶液通過(guò)0.25μm的濾膜除菌。

實(shí)施例2