[發(fā)明專利]一種水蛭藥材、飲片及炮制品的體外生物活性測(cè)定方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110677706.1 | 申請(qǐng)日： | 2021-06-18 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN113406265A | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-09-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 代龍;高鵬;劉國(guó)飛;孫志強(qiáng);柏道鳴;于海濤 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山東禹澤藥康產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院有限公司;山東中醫(yī)藥大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | G01N31/16 | 分類號(hào)： | G01N31/16;A61K35/62;A61P7/02 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 251200 山東省德州市*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 水蛭 藥材 飲片 炮制 體外 生物 活性 測(cè)定 方法 | ||
1.一種水蛭藥材、飲片及炮制品的體外生物活性測(cè)定方法，其特征在于，具體測(cè)定步驟為：
（1）供試品溶液的制備：取水蛭，粉碎過(guò)三號(hào)篩，稱取2.5g，精密稱定，加入水20ml，稱定重量，85℃加熱15分鐘，冷卻至40℃，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH為2.0，加入酶底比1%的胃蛋白酶，40℃酶解1小時(shí)，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為8.0，加入酶底比1%的胰蛋白酶，40℃酶解3小時(shí)，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至近中性，85℃加熱15分鐘，待冷至室溫，高速離心，上清液置25ml量瓶中，沉淀再加水5ml洗滌，高速離心，上清液并入量瓶中，加水至刻度，混勻，濾過(guò)，即得；
（2）測(cè)定法：精密量取供試品溶液100μl，置試管中，加入含有0.5%纖維蛋白原（以固形物計(jì)）的三羥甲基氨基甲烷鹽酸緩沖液200μl，搖勻，置37℃水浴中溫浸5分鐘，滴加每1ml中含10單位的凝血酶溶液（每4分鐘滴加1次，每次2μl，邊滴加邊輕輕搖勻）至凝固，記錄消耗凝血酶溶液體積，按下式計(jì)算抗凝血酶活力：
U=C1V1/（C2V2）
式中：U——每1g水蛭含抗凝血酶活性單位，U/g；
C1——凝血酶溶液的濃度，U/ml；
C2——供試品溶液的濃度，g/ml；
V1——消耗凝血酶溶液的體積，μl；
V1——供試品溶液的加入量，μl。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水蛭藥材、飲片及炮制品的體外生物活性測(cè)定方法，其特征在于所用胃蛋白酶酶活力為1:15000，胰蛋白酶酶活力為2500U/mg。
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