[發(fā)明專利]用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的分子標(biāo)記Oil-4-3776551、試劑盒和方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110677322.X | 申請(qǐng)日： | 2021-06-18 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113278726B | 公開（公告）日： | 2022-09-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 孫君明;張晟瑞;李斌;艾哈邁德·馬布魯克·阿卜杜勒法德爾·阿卜杜勒加尼;劉藝田;李靜 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6895 | 分類號(hào)： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129 | 代理人： | 向群 |
| 地址： | 100081 北*** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 輔助 鑒別 大豆 油脂 含量 高低 分子 標(biāo)記 oil 3776551 試劑盒 方法 | ||
1.一種用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的分子標(biāo)記Oil-4-3776551的檢測(cè)引物，其特征在于，檢測(cè)分子標(biāo)記Oil-4-3776551的引物的序列分別如SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4所示；所述分子標(biāo)記Oil-4-3776551為大豆第4號(hào)染色體第3776551位點(diǎn)的SNP突變g.4-3776551 AG。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的分子標(biāo)記Oil-4-3776551的檢測(cè)引物，其特征在于，所述分子標(biāo)記Oil-4-3776551的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
3.一種用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的試劑盒，其特征在于，包括檢測(cè)分子標(biāo)記Oil-4-3776551的引物；所述引物的序列如SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述分子標(biāo)記Oil-4-3776551的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括用于PCR的試劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述用于PCR的試劑包括：dNTPs、Taq酶、PCR緩沖液、ddH2O。
7.一種用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，采用檢測(cè)用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的分子標(biāo)記Oil-4-3776551的引物進(jìn)行輔助鑒別；所述引物的序列分別如SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4所示；所述輔助鑒別的結(jié)果為AA的大豆材料為高油型大豆；檢測(cè)結(jié)果為GG的大豆材料為低油型大豆。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，所述分子標(biāo)記Oil-4-3776551的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的一種用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，所述輔助鑒別指：采用所述引物對(duì)待測(cè)大豆材料的DNA進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性等位基因特異性PCR擴(kuò)增，利用Kluster Caller基因分型儀檢測(cè)PCR產(chǎn)物的熒光信號(hào)，按鑒別結(jié)果對(duì)Oil-4-3776551標(biāo)記進(jìn)行分型。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，所述待測(cè)大豆材料的DNA提取自大豆葉片、種子、根、莖、花、果實(shí)。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，所述PCR的反應(yīng)體系為2.5 μL基因組DNA，正向引物1和正向引物2各0.00672 μL，反向引物0.0168 μL，2.5 μL 2×KASP Master mix緩沖液，0.231μL ddH2O；正向引物1的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示，正向引物2的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用于輔助鑒別大豆油脂含量高低的方法，其特征在于，PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃，15 min；以94℃、20s，65-57℃、60s，每個(gè)循環(huán)下降0.8度，共10個(gè)循環(huán)；以94℃、20s，57℃、60s，共33個(gè)循環(huán)。
13.一種大豆分子輔助育種方法，其特征在于，采用權(quán)利要求7-12任一所述的方法在大豆生長(zhǎng)周期的任意階段篩選出高油型大豆或低油型大豆用于大豆育種。
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