[發(fā)明專利]一種提高5-羥基色氨酸產(chǎn)量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110677156.3
• 申請(qǐng)日: 2021-06-18
• 公開（公告）號(hào): CN113373103B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐慶陽;余子辰;張震
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/38
• 分類號(hào): C12N1/38;C12N1/20;C12P13/22;C12R1/19
• 代理公司: 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司 12107
• 代理人: 李蕊

1.一種提高5-羥基色氨酸產(chǎn)量的方法，其特征在于：采用5-羥基色氨酸生產(chǎn)菌E.coliHTP10，在發(fā)酵中期產(chǎn)酸階段減少通風(fēng)量，控制溶氧在5%-40%，流加檸檬酸，保證BH4合成過程還原力充足，從菌體對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期開始進(jìn)行補(bǔ)糖流加，流加糖速率5-6g/L.h；8-10h，流加糖速率7-8g/L.h；10-12h，流加糖速率9-10g/L.h；12-18h，流加糖速率11-12g/L.h；18-24h，流加糖速率10-11g/L.h；24-32h，流加糖速率9-10g/L.h，減少色氨酸累積。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高5-羥基色氨酸產(chǎn)量的方法，其特征在于：具體步驟如下：

（1）活化培養(yǎng)：從-80℃冰箱中取出5-羥基色氨酸生產(chǎn)菌E.coli HTP10保菌管，傳兩代斜面，活化培養(yǎng)，采用的斜面培養(yǎng)基包括：葡萄糖1-3 g/L，蛋白胨5-10 g/L，牛肉膏5-10 g/L，酵母浸出粉2-5 g/L，氯化鈉 2-5 g/L，瓊脂粉15-30 g/L；

（2）種子培養(yǎng)：將活化菌株全部接種到種子罐，得到種子液，采用的種子培養(yǎng)基為：葡萄糖20-40 g/L，酵母浸出粉2-5 g/L，硫酸銨1-5 g/L，磷酸二氫鉀1-5 g/L，無水硫酸鎂0.5-2g/L，七水硫酸亞鐵10-30 mg/L，一水硫酸錳10-30 mg/L，V_H 0.1-0.5 mg/L，V_B1 0.5-1 mg/L，微量元素混合液1-2 ml,消泡劑1 g/L，并用氨水將培養(yǎng)基調(diào)節(jié)并維持pH到6.7~7.0；

（3）發(fā)酵培養(yǎng)：接種12-16%的種子液到發(fā)酵罐，連續(xù)培養(yǎng)，中間補(bǔ)料，得到發(fā)酵液，采用的發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖20-40 g/L，酵母浸出粉2-5 g/L，硫酸銨1-5 g/L，磷酸二氫鉀1-5g/L，無水硫酸鎂0.5-2 g/L，七水硫酸亞鐵30-60 mg/L，一水硫酸錳20-40 mg/L，V_H 0.1-0.5 mg/L，V_B1 0.5-1 mg/L，微量元素混合液1-2 ml，用氨水將發(fā)酵罐培養(yǎng)調(diào)節(jié)并維持pH到6.7-7.0；其中，在發(fā)酵8h后，流加0.4-1%檸檬酸水溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提高5-羥基色氨酸產(chǎn)量的方法，其特征在于：所述微量元素混合液組分含量為鉬酸銨0.28mg/L，硼酸5mg/L，CoCl₂^.6H₂O 1.4mg/L，MnSO₄^.H₂O 0.5mg/L，CuSO₄^.7H₂O 0.5mg/L，ZnSO₄^.7H₂O 0.6mg/L，上述成分稱量固體后溶解于1L水中，在 4℃保存。

4.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的提高5-羥基色氨酸產(chǎn)量的方法，其特征在于：中間補(bǔ)料為0.4-1%檸檬酸水溶液，流加策略為發(fā)酵罐配制培養(yǎng)基2.7L，從發(fā)酵8h開始流加300ml 0.4-1%檸檬酸水溶液，流加到發(fā)酵結(jié)束。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提高5-羥基色氨酸產(chǎn)量的方法，其特征在于：所述發(fā)酵罐基礎(chǔ)培養(yǎng)條件：接種量600 ml，發(fā)酵體積3 L, 培養(yǎng)溫度32℃，pH 6.8-7.0，轉(zhuǎn)速與溶氧聯(lián)動(dòng)，發(fā)酵時(shí)間32 h。