[發(fā)明專利]GMP級(jí)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的純化方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110676917.3
• 申請(qǐng)日: 2021-06-18
• 公開（公告）號(hào): CN113373120B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱建高;李佳佳;楊文君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江康佰裕生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/02
• 分類號(hào): C12N7/02;C12N15/867;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.純化逆轉(zhuǎn)錄病毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

A）、對(duì)含有逆轉(zhuǎn)錄病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行微濾處理，以除去所述細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的細(xì)胞碎片，獲得微濾病毒液；

B）、對(duì)所述微濾病毒液進(jìn)行核酸酶處理，以將宿主DNA殘留降解為小片段DNA，獲得酶消化病毒液；

C）、將所述酶消化病毒液進(jìn)行超濾，使所述逆轉(zhuǎn)錄病毒留在截留液中，收集截留液，獲得超濾病毒液；

D）、低速離心處理所述超濾病毒液，使所述逆轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)行沉淀，收集沉淀，得到未經(jīng)除菌的病毒；

所述方法還包括對(duì)所述未經(jīng)除菌的病毒進(jìn)行過濾除菌得到純化的逆轉(zhuǎn)錄病毒的步驟；

所述微濾處理中，所采用的半透膜的膜分離孔徑為0.45μm-0.75μm，所述細(xì)胞培養(yǎng)上清液的流速為89mL?min^-1-133.5mL?min^-1，所述微濾處理的剪切速率為2000 s^-1-3000 s^-1；

所述核酸酶處理中，反應(yīng)體系中的核酸酶濃度為1~500 U·mL^-1，2~8℃反應(yīng)8-24小時(shí)；

步驟C）中所述超濾包括：

c1) 對(duì)所述酶消化病毒液使用截留相對(duì)分子質(zhì)量為750KD、中空纖維毛細(xì)管的內(nèi)徑為0.5mm、半透膜的膜面積為0.16m²的中空纖維柱進(jìn)行剪切速率為2000 s^-1的超濾，得到一級(jí)病毒超濾液；

c2) 對(duì)所述一級(jí)病毒超濾液使用截留相對(duì)分子質(zhì)量為750KD、中空纖維毛細(xì)管的內(nèi)徑為0.5mm、半透膜的膜面積為0.0115m²的中空纖維柱進(jìn)行剪切速率為2000 s^-1的超濾，得到二級(jí)病毒超濾液；

步驟D)中低速離心的處理?xiàng)l件為：離心力4000g~10000g，離心4~24h。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所采用的半透膜的膜材質(zhì)為改性聚醚砜。

3.權(quán)利要求1或2所述方法在制備基因治療產(chǎn)品和/或細(xì)胞治療產(chǎn)品和/或免疫治療產(chǎn)品中的應(yīng)用。