[發(fā)明專(zhuān)利]表達(dá)趨化因子受體的具有實(shí)體腫瘤定向趨化能力的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞、及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110675890.6
• 申請(qǐng)日: 2021-06-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113322238B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張進(jìn);雷安華;朱萌濛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/10;C12N15/12;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京超凡宏宇專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 陳露

本發(fā)明提供了一種表達(dá)趨化因子受體的具有實(shí)體腫瘤定向趨化能力的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞、及其制備和應(yīng)用，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種巨噬細(xì)胞，該巨噬細(xì)胞過(guò)表達(dá)趨化因子受體，具有向?qū)嶓w腫瘤趨化遷移的能力以及顯著的向腫瘤趨化遷移和浸潤(rùn)的效果，能夠提高過(guò)繼移植巨噬細(xì)胞的特異性殺傷效率和利用率，降低對(duì)正常組織的非特異性免疫攻擊。本發(fā)明提供了一種巨噬細(xì)胞的制備方法，包括構(gòu)建含有趨化因子受體基因的慢病毒表達(dá)體系，利用慢病毒表達(dá)體系將趨化因子受體基因整合到多能干細(xì)胞或者單核巨噬細(xì)胞中，經(jīng)誘導(dǎo)分化后制備得到巨噬細(xì)胞，該巨噬細(xì)胞能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定的過(guò)表達(dá)趨化因子受體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種表達(dá)趨化因子受體的具有實(shí)體腫瘤定向趨化能力的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞、及其制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

CAR-T是一種治療腫瘤的新型精準(zhǔn)靶向療法，在血液腫瘤中起到了較好的治療效果，但由于受到脫靶效應(yīng)和腫瘤微環(huán)境抑制因素的影響，其在各類(lèi)實(shí)體瘤的治療中仍不理想。因此針對(duì)實(shí)體腫瘤的免疫治療急需找到更加有效和安全的替代者。Macrophage由于在過(guò)繼性免疫系統(tǒng)和先天性免疫系統(tǒng)的相互作用中起著核心作用，且具備較強(qiáng)的可塑性和在腫瘤組織中長(zhǎng)時(shí)間駐存等方面的特性，正在成為實(shí)體腫瘤免疫細(xì)胞治療的新選擇。另外，已有研究試圖通過(guò)顱內(nèi)注射的方式將CAR-T等免疫細(xì)胞輸送到腫瘤灶，以期達(dá)到治療的目的。然而該方法可操作性較差。因此，針對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)等實(shí)體腫瘤的治療探索出一種新的遞送過(guò)繼移植Macrophage的方式就成了腫瘤免疫細(xì)胞治療的關(guān)鍵。

在實(shí)體腫瘤免疫細(xì)胞治療的過(guò)程中，過(guò)繼移植免疫細(xì)胞的有效遞送和對(duì)腫瘤組織的浸潤(rùn)是制約治療效果的關(guān)鍵。例如，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)位于機(jī)體大腦內(nèi)部，受到血腦屏障和細(xì)胞外致密的基質(zhì)的阻擾，傳統(tǒng)的過(guò)繼移植免疫細(xì)胞往往很難遞送到腫瘤病發(fā)灶。因此開(kāi)發(fā)出過(guò)繼免疫細(xì)胞新的遞送方式就成為包括腦癌在內(nèi)的實(shí)體腫瘤治療的關(guān)鍵一環(huán)。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種巨噬細(xì)胞，該巨噬細(xì)胞具有向?qū)嶓w腫瘤組織趨化遷移的能力，能夠提高繼移植巨噬細(xì)胞的特異性殺傷效率和利用率，以解決上述問(wèn)題中的至少一種。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種巨噬細(xì)胞的制備方法。

本發(fā)明的第三目的在于提供一種多能干細(xì)胞。

本發(fā)明的第四目的在于提供一種單核巨噬細(xì)胞。

本發(fā)明的第五目的在于提供一種單核細(xì)胞。

本發(fā)明的第六目的在于提供一種巨噬細(xì)胞、多能干細(xì)胞或單核巨噬細(xì)胞在制備用于治療腫瘤的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第七目的在于提供一種用于治療腫瘤的產(chǎn)品。

第一方面，本發(fā)明提供了一種巨噬細(xì)胞，所述巨噬細(xì)胞過(guò)表達(dá)趨化因子受體。

作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述趨化因子受體包括CCR2B、CCR5、CCR9、CX3CR3、CXCR1、CXCR2、CXCR4、CCR1、CCR3、CCR4、CCR6、CCR7、CCR8、CCR10、XCR1、CXCR3、CXCR5或CXCR6中的至少一種。

作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述巨噬細(xì)胞由多能干細(xì)胞、單核細(xì)胞或者單核巨噬細(xì)胞分化得到。

作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述多能干細(xì)胞、單核細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞含有編碼所述趨化因子受體的基因。

第二方面，本發(fā)明提供了一種巨噬細(xì)胞的制備方法，包括如下步驟：構(gòu)建含有趨化因子受體基因的慢病毒表達(dá)體系，利用慢病毒表達(dá)體系將趨化因子受體基因整合到多能干細(xì)胞或者單核巨噬細(xì)胞中，經(jīng)誘導(dǎo)分化后制備得到巨噬細(xì)胞；

優(yōu)選地，所述多能干細(xì)胞先誘導(dǎo)分化為單核細(xì)胞，再分化得到巨噬細(xì)胞。