[發明專利]血清LRG1蛋白在制備肝內膽管癌淋巴結診斷試劑盒中的應用

在審

• 申請號: 202110675135.8
• 申請日: 2021-06-17
• 公開（公告）號: CN114113439A
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 劉紅枝;曾永毅;蔡遴晟
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學孟超肝膽醫院（福州市傳染病醫院）
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N21/84
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

本發明涉及血清LRG1蛋白在制備肝內膽管癌淋巴結轉移診斷試劑盒中的應用。本發明的有益效果主要體現在：本發明提供了血清LRG1蛋白作為肝內膽管癌病人血清淋巴結轉移診斷標志物的新用途，可采用基于TMT標記的定量蛋白質組學技術，根據體內血清蛋白質組學數據對肝內膽管癌病人進行全面系統的研究，該標志物經過ELISA驗證，結果更為可靠，可為臨床應用提供有價值的信息。

(一)技術領域

本發明涉及血清LRG1蛋白在制備肝內膽管癌淋巴結轉移診斷試劑 盒中的應用。

(二)背景技術

肝內膽管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC)起源于肝內膽管 上皮細胞的惡性轉化，是第二位常見的肝內惡性腫瘤，占原發性肝臟惡性 腫瘤的5-15％。近年來，ICC發病率在全世界范圍內不斷增加，其侵襲能 力強、惡性程度高、預后差。淋巴結轉移是肝內膽管癌分期和預后的重要 因素，明確淋巴結轉移狀態對精準分期、預后判斷及術后輔助治療決策具 有重要意義。

富含亮氨酸的α-2-糖蛋白(leucine-richalpha-2-glycoprotein，LRG) 為富含亮氨酸重復序列家族中最早發現的成員，包含8個富亮氨酸重復 序列(leucine-richrepeat，LRR)，每個LRR長度多為20～30個氨基 酸殘基。LRG1可以與TGFβRⅡ/ALK1形成LRG1-ALK1-TGFβRⅡ -ENG復合物，該復合物會激活下游Smad1/5/8通路，發揮促進內皮細胞的遷移及血管生成的作用，因此LRG1表達水平的改變對腫瘤發生發展及 其生物學行為有重要影響。其在胃癌、結腸癌、胰腺癌等疾病進展中具有 重要意義，但血清LRG1在肝內膽管癌淋巴結轉移診斷方面目前尚無報 道。

(三)發明內容

本發明是對LRG1能否作為肝內膽管癌淋巴結診斷標志物進行研究， 提供血清LRG1蛋白在肝內膽管癌淋巴結轉移診斷中的應用。

本發明采用的技術方案是：

血清LRG1蛋白在制備肝內膽管癌淋巴結診斷試劑盒中的應用。本發 明利用TMT結合質譜技術檢測肝內膽管癌病人術前血清，發現生物標志 物LRG1蛋白在肝內膽管癌淋巴結轉移病人術前血清中濃度明顯高于未 發生淋巴結轉移病人的血清濃度，經ELISA驗證表明LRG1蛋白在肝內 膽管癌淋巴結轉移病人血清中濃度明顯高于未發生淋巴結病人、且其血清 濃度與淋巴結轉移陽性數目和陽性比呈正相關。

所述LRG1蛋白序列如下：

MSSWSRQRPKSPGGIQPHVSRTLFLLLLLAASAWGVTLSPKDCQ VFRSDHGSSISCQPPAEIPGYLPADTVHLAVEFFNLTHLPANLLQGASK LQELHLSSNGLESLSPEFLRPVPQLRVLDLTRNALTGLPPGLFQASATLDTLVLKENQLEVLEVSWLHGLKALGHLDLSGNRLRKLPPGLLANFTL LRTLDLGENQLETLPPDLLRGPLQLERLHLEGNKLQVLGKDLLLPQPD LRYLFLNGNKLARVAAGAFQGLRQLDMLDLSNNSLASVPEGLWASL GQPNWDMRDGFDISGNPWICDQNLSDLYRWLQAQKDKMFSQNDTR CAGPEAVKGQTLLAVAKSQ

優選的，所述試劑盒為診斷肝內膽管癌淋巴轉移的試劑盒。

具體的，所述試劑盒可為檢測LRG1蛋白濃度的TMT試劑盒或 ELISA試劑盒。

TMT技術是一種多肽體外標記技術，該技術采用10種同位素的標簽， 特異性標記多肽的氨基基團，經過串聯質譜LC-MS/MS分析，可同時比 較10組不同樣品中蛋白質的相對含量。

本發明中用于檢測LRG1蛋白的TMT試劑盒具體組成如下：

TMT¹⁰ 126label reagent，2×0.8mg