[發明專利]一種DNA甲基化標志物及其應用

有效

• 申請號: 202110674405.3
• 申請日: 2021-06-17
• 公開（公告）號: CN113373213B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: 彭浩;張明芝;何艷
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

本發明涉及一種DNA甲基化標志物，為NPPA基因啟動子區的甲基化位點Chr1:11908353，其甲基化程度指示高血壓或腦卒中發病風險。本發明提供的DNA甲基化標志物可用于預測腦卒中發病風險，為腦卒中高危人群的篩查提供依據，也可以作為預防和控制高血壓及腦卒中的干預靶點。本發明不僅有助于闡釋心房利鈉肽作用于高血壓和腦卒中的分子機制，也將為NPPA基因甲基化作為預防和控制高血壓和腦卒中的藥物靶點提供重要的流行病學證據。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種DNA甲基化標志物及其應用。

背景技術

高血壓既是一種心血管疾病，也是其它多種心腦血管疾病的重要危險因素。全球有67％的心臟病，54％的腦卒中由高血壓引起，13.5％的死亡歸因于高血壓。其中，腦卒中作為一個全球性的健康問題，現已成為威脅我國居民生命健康的首要疾病，每年給我國居民帶來了巨大的疾病負擔和經濟損失。2015年中國卒中協會首次發布的《中國卒中流行報告》結果顯示，我國每年腦血管病新發患者約270萬，每年死于腦血管病的患者約130萬，每12秒就有一人發生腦卒中，每21秒就有人死于腦卒中。因此，如何有效地預防和控制腦卒中是目前我國面臨的重大公共衛生挑戰，尋找并發現更多腦卒中的潛在危險因素和干預靶點迫在眉睫。

利鈉肽軸是機體應對外界環境刺激的重要的心臟內分泌調節系統，在維持機體水鈉平衡、血壓穩定和能量代謝平衡方面發揮著重要作用。利鈉肽軸主要由心房鈉尿肽(ANP)、腦鈉尿肽(BNP)、C型鈉尿肽(CNP)以及他們的受體構成。當血容量增加時，心肌細胞就會分泌并釋放大量的無生物活性的心房鈉尿肽前體(pro-ANP)和腦鈉尿肽前體(pro-BNP)，pro-ANP、pro-NNP進一步活化為有活性的ANP和BNP，并與其受體結合激活利鈉肽軸，進而促進水鈉代謝、降低血容量、擴張血管、促進能量代謝，從而維持心血管穩態。

目前，尚未見關于ANP的編碼基因NPPA的DNA甲基化與高血壓和腦卒中的研究報道，也沒有報道一種合適的甲基化標志物可作為預防和控制高血壓和腦卒中的干預靶點。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明通過對DNA甲基化與高血壓和腦卒中表型相關性的研究，提供一種與高血壓和腦卒中相關的DNA甲基化標志物，其在預測腦卒中發病風險、腦卒中高危人群的篩查提供依據，也有望作為預防和控制高血壓和腦卒中的干預靶點。

本發明的第一個目的是提供一種DNA甲基化標志物，為NPPA基因啟動子區的甲基化位點Chr1:11908353，并且甲基化程度與高血壓或腦卒中的發病風險程度相關。

上述高血壓、腦卒中相關的NPPA基因DNA甲基化標志物的檢測方法，包括以下步驟：

(1)提取DNA樣本，并對DNA樣本進行重亞硫酸鹽處理；

(2)用合適的引物對擴增步驟(1)經重亞硫酸鹽處理后的樣品，得到擴增產物；

(3)對步驟(2)的擴增產物進行轉錄和酶切，得到轉錄和酶切產物；

(4)對步驟(3)的轉錄和酶切產物進行檢測，獲取樣品序列中的甲基化程度。

上述DNA甲基化標志物在制備用于預測或檢測高血壓或腦卒中發病風險試劑中的應用。

上述DNA甲基化標志物在制備用于腦卒中高危人群篩查試劑中的應用。

上述DNA甲基化標志物在制備高血壓或腦卒中治療藥物中的應用。

進一步地，DNA甲基化是可修復的，治療藥物是基于上述NPPA基因DNA甲基化位點或NPPA基因設計的靶向藥物，可以調控NPPA基因的表達和ANP的分泌，進而達到降低血壓、治療腦卒中的目的。

本發明的第二個目的是提供一種預測腦卒中發病風險的試劑盒，包含檢測上述DNA甲基化標志物的甲基化程度的試劑。