[發(fā)明專利]一種油茶愈傷組織離體培養(yǎng)及核型分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110673917.8
• 申請日: 2021-06-17
• 公開（公告）號: CN113966716A
• 公開（公告）日: 2022-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曾海濤;徐皓;劉林秀;郭鐵城;唐琪;茍玉琴;馬康
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西理工大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04;G01N1/28;G01N1/30;G01N21/84
• 代理公司: 北京匯知杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11587
• 代理人: 楊巍;柴春玲

1.一種油茶愈傷組織離體培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

1)取油茶當(dāng)年生幼嫩枝條或初生枝條上的帶葉柄的幼嫩鮮綠色葉片，用0.1％升汞消毒；

2)將枝條或葉片切成合適大小后接種到基本培養(yǎng)基上無菌培養(yǎng)；

3)將枝條或葉片培養(yǎng)合適時間后移至包含0.5-3.5mg.L^-16-BA和0.01-0.3mg.L^-1IAA的MS培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)誘導(dǎo)愈傷組織。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，當(dāng)使用枝條時，步驟1)中的消毒為用0.1％的升汞消毒兩次，第一次10min，第二次5min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，當(dāng)使用葉片時，步驟1)中的消毒為用0.1％的升汞消毒10min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，步驟3)中的合適時間為于溫室中先暗培養(yǎng)4天，再在光照條件下培養(yǎng)20天。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，步驟3)中的誘導(dǎo)培養(yǎng)在含有2.0mg·L^-16-BA+0.1mg·L^-1IAA的MS培養(yǎng)基上進行。

6.一種使用油茶愈傷組織后進行核型分析的方法，包括以下步驟：

1)根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的方法獲得油茶愈傷組織；

2)將誘導(dǎo)的油茶愈傷組織壓片并染色，進行核型分析。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的油茶染色體壓片，其中壓片所用的細(xì)胞為中期分裂相細(xì)胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的油茶染色體壓片，其中染色前將油茶愈傷組織用飽和對二氯苯溶液預(yù)處理。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的油茶染色體壓片，其中將油茶愈傷組織用飽和對二氯苯溶液預(yù)處理后再使用卡諾固定液(無水乙醇：冰乙酸＝3：1)固定3小時。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的油茶染色體壓片，其中將油茶愈傷組織使用卡諾固定液固定3小時后再放入1mol/L預(yù)熱為60℃鹽酸溶液中解離7.5分鐘。