[發明專利]一種非病毒載體及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202110673040.2
• 申請日: 2021-06-17
• 公開（公告）號: CN113368261A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 張學農;王鈺;黃歸
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K31/7088;A61K38/46;A61K47/69;A61K47/42;A61K47/60;A61K47/61;A61P35/00
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

1.一種非病毒載體，其特征在于，所述的非病毒載體包括壓縮質粒藥物的魚精蛋白，包覆在壓縮了核酸藥物的魚精蛋白表面的陽離子脂質體，以及修飾在陽離子脂質體表面的二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-透明質酸聚合物。

2.根據權利要求1所述的非病毒載體，其特征在于，所述的陽離子脂質體為DOPE/DOTAP/Chol。

3.根據權利要求1所述的非病毒載體，其特征在于，所述的質粒藥物為基因編輯質粒。

4.根據權利要求3所述的非病毒載體，其特征在于，所述的基因編輯質粒為pCas9/sgMTH1、pCas9/sgKRAS、pCas9/sgPLK1、pCas9/sgMETTL3中的一種或幾種。

5.一種權利要求1～4任一項所述的非病毒載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、采用透明質酸和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇為原料制備二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-透明質酸聚合物；

S2、采用DOTAP、DOPE和膽固醇為原料制備陽離子脂質體；

S3、將魚精蛋白溶液與質粒藥物溶液混合孵育，制備魚精蛋白/質粒藥物復合物；

S4、將魚精蛋白/質粒藥物復合物與陽離子脂質體混合孵育，得到陽離子脂質體包覆的魚精蛋白/質粒藥物復合物；

S5、將陽離子脂質體包覆的魚精蛋白/質粒藥物復合物與二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-透明質酸聚合物的水溶液混合孵育，得到所述的非病毒載體。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，S3步驟中，孵育是在20～30℃孵育4-6min，魚精蛋白與質粒藥物的質量比為1.8-2.2:1。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，S4步驟中，孵育是在20～30℃孵育15-25min，魚精蛋白/質粒藥物復合物與陽離子脂質體的質量比為3:11-11.5。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，S5步驟中，孵育是在50-60℃孵育15-25min，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-透明質酸聚合物的水溶液中，二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-透明質酸聚合物的濃度為19-21mg·mL^-1。

9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，S1步驟中，透明質酸通過活化劑活化后與二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇進行反應，所述活化劑為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和二環己基碳二亞胺中的一種或幾種。

10.權利要求1～4任一項所述的非病毒載體在遞送CRISPR/Cas9系統中的應用。