[發明專利]快速檢測SARS-CoV-2抗原和IgG/IgM抗體的微流控生物芯片

在審

• 申請號: 202110672938.8
• 申請日: 2021-06-17
• 公開（公告）號: CN113311160A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 韓琳;張宇;王春華;劉宏;邢志青;陳莉;張平
• 申請（專利權）人: 山東科訊生物芯片技術有限公司;山東大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;B01L3/00
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 房一粟

1.快速檢測SARS-CoV-2抗原和IgG/IgM抗體的微流控生物芯片的制作方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)制備帶有檢測條形碼陣列的GOQDs基層；

(2)利用基底和ICP刻蝕工藝制作基底模具；

(3)利用步驟(2)獲得的基底模具制備PDMS層，其上打孔產生抗體/抗原陣列的出入口，打孔后將其與步驟(1)中獲得的GOQDs基層結合形成間隔編碼微流控生物芯片，將捕獲抗體/抗原特異性探針加載到獲得的間隔編碼微流控生物芯片的與芯片上微通道相連的入口中，將抗體/抗原探針陣列微打印在微通道內的基層上，獲得加載捕獲抗體/抗原的間隔編碼微流控生物芯片；

(4)再制作兩個PDMS層，將兩個PDMS層對齊后烘烤，形成精確定量樣品檢測PDMS層；

(5)步驟(3)獲得加載捕獲抗體/抗原的間隔編碼微流控生物芯片和步驟(4)獲得的精確定量樣品檢測PDMS層結合，即可形成快速檢測SARS-CoV-2抗原和IgG/IgM抗體的微流控生物芯片。

2.如權利要求1所述的微流控生物芯片的制作方法，其特征在于，步驟(1)中所述的制備帶有檢測條形碼陣列的GOQDs功能化底物的方法，包括如下步驟：

S1取玻璃基板清洗后使用APTES溶液處理，清洗后獲得經過APTES處理后的玻璃基板；

S2將步驟S1中獲得的經過APTES處理后的玻璃基板放入GOQDs溶液中自組裝GOQDs，完成后沖洗去除多余GOQDs，在帶有GOQDs的玻璃基板上微打印抗體/抗原檢測探針條形碼陣列，獲得帶有檢測條形碼陣列的GOQDs基層。

3.如權利要求2所述的微流控生物芯片的制作方法，其特征在于，所述的APTES溶液的濃度為1-5％，所述的GOQDs溶液的濃度1-5mg/mL。

4.如權利要求1所述的微流控生物芯片的制作方法，其特征在于，步驟(2)中所述的基底模具為具有20-30個寬度為5-50μm的平行條帶狀凸起的硅片模具。

5.如權利要求1所述的微流控生物芯片的制作方法，其特征在于，步驟(3)中所述的制備PDMS層的方法包括如下步驟：

將步驟(2)中獲得硅片模具放入TMCS中浸泡15-20min，將Sylgard 184A和Sylgard184B按照重量比為10:1的比例混合后加載到經過TMCS處理過的硅片模具上，氣泡抽真空后，放入70-80℃中固化60min，將PDMS層從硅片模具上剝離，獲得PDMS層。

6.如權利要求1所述的微流控生物芯片的制作方法，其特征在于，步驟(4)中所述的兩個PDMS層指的是一個厚度為0.5-1mm的PDMS層和一個厚度為2-3mm的PDMS層。

7.一種依據權利要求1所述的微流控生物芯片的制作方法制備的快速檢測SARS-CoV-2抗原和IgG/IgM抗體的微流控生物芯片。

8.如權利要求7所述的微流控生物芯片在快速檢測SARS-CoV-2抗原和IgG/IgM抗體中的應用。

9.如權利要求8中所述的應用的應用方法，其特征在于，包括如下步驟：

將待測樣品導入微流控生物芯片的微腔中，室溫孵育3～20min，用1％的BSA從間隔編碼微流控生物芯片上剝離精確定量樣品檢測PDMS層，1％BSA溶液沖洗間隔編碼微流控生物芯片，將300μL熒光共軛檢測抗體復合物加載分散到整個間隔編碼微流控生物芯片表面，使用1％BSA、1×PBS、0.5×PBS和去離子水依次沖洗，干燥后使用熒光掃描儀掃描間隔編碼微流控生物芯片獲得并分析目標抗體/抗原濃度。

10.如權利要求9所述的應用方法，其特征在于，所述的熒光共軛檢測抗體復合物的濃度為5-20μg/ml。