[發明專利]一種高效西瓜遺傳轉化體系及應用

有效

• 申請號: 202110668987.4
• 申請日: 2021-06-16
• 公開（公告）號: CN113549647B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 張華偉;章旺根;潘文波;程振濤
• 申請（專利權）人: 北京大學現代農業研究院
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/65;A01H5/00;A01H6/34
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 路秀麗

1.一種西瓜遺傳轉化的方法，所述方法包括

在西瓜遺傳轉化中表達生長調節基因；

其中所述生長調節基因為AtGRF5、TaGRF4-OsGIF1或ZmWUS+ZmBBM基因。

2.根據權利要求1所述的方法，其中

i）所述AtGRF5為SEQ?ID?NO.4所示的核酸序列并且具有提高植物轉化效率的功能的核酸，或者是可編碼SEQ?ID?NO.15所示的氨基酸序列并且具有提高植物轉化效率的功能的蛋白的核酸序列；

ii）所述TaGRF4-OsGIF1為SEQ?ID?NO.7所示的核酸序列并且具有提高植物轉化效率的功能的核酸，或者是可編碼SEQ?ID?NO.18所示的氨基酸序列并且具有提高植物轉化效率的功能的蛋白的核酸序列；

iii）所述ZmWUS+ZmBBM為SEQ?ID?NO.8和SEQ?ID?NO.12所示的核酸序列并且具有提高植物轉化效率的功能的核酸，或者是可編碼SEQ?ID?NO.19和SEQ?ID?NO.20所示的氨基酸序列并且具有提高植物轉化效率的功能的蛋白的核酸序列。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述表達包括：

i）組成型表達：將生長調節基因核酸序列與表達調控元件可操作的連接，形成核酸構建體，其所述表達調控元件包括啟動子和終止子，所述啟動子包括擬南芥UBQ10啟動子、Nos啟動子或煙草花葉病毒35S啟動子中的一種或多種，所述終止子包括煙草花葉病毒終止子CamT或擬南芥HspT終止子中的一種或多種；

ii）瞬時表達：直接在西瓜細胞中導入權利要求2所述氨基酸序列，或者是能翻譯成所述氨基酸序列的mRNA核酸序列或DNA核酸序列。

4.根據權利要求3所述的方法，所述擬南芥UBQ10啟動子的序列為SEQ?ID?NO.1所示的序列；所述Nos啟動子的序列為SEQ?ID?NO.9所示的序列；所述煙草花葉病毒終止子CamT的序列為SEQ?ID?NO.10所示的序列；所述擬南芥HspT終止子的序列為SEQ?ID?NO.3所示的序列。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述遺傳轉化，指在目的植物細胞中表達外源核酸序列、mRNA序列和氨基酸序列，其中所述外源核酸序列包含蛋白質基因功能的啟動子、基因、終止子、抑制子和增強子，其中所述外源核酸序列為改變植物的性狀，或者改變植物細胞的基因組序列或轉錄組序列。

6.根據權利要求5所述的方法，所述性狀包括農藝性狀。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述西瓜遺傳轉化的方法包括土壤農桿菌介導的轉化、基因槍法、PEG介導的原生質體轉化、植物病毒介導的轉化、花粉管通道法、電擊轉化法或子房注射法。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述西瓜遺傳轉化的材料包括西瓜子葉、子葉節、幼胚、成熟胚或原生質體。

9.根據權利要求1所述的方法，所述方法包括進一步使用熒光蛋白作為遺傳轉化篩選標記。

10.根據權利要求9的方法，所述熒光蛋白作為轉基因事件篩選標記以判斷是否發生目的基因的整合，編碼所述熒光蛋白的基因包括DsRed2熒光蛋白基因、青色熒光蛋白基因、黃色熒光蛋白基因、熒光素酶基因、綠色熒光蛋白基因及花青甙p1中的一種或多種基因。

11.根據權利要求10所述的方法，所述熒光蛋白為DsRed2熒光蛋白。

12.根據權利要求10所述的方法，其中編碼所述DsRed2熒光蛋白的基因為SEQ?ID?NO.1所示的核酸序列并且能編碼熒光蛋白的核酸，或者所述DsRed2熒光蛋白為SEQ?ID?NO.16所示的氨基酸序列并且具有熒光蛋白功能的蛋白。