[發明專利]一種制備迷迭香熊果酸的方法

在審

• 申請號: 202110668743.6
• 申請日: 2021-06-09
• 公開（公告）號: CN113480592A
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 張川;周小華;周志明;陳鵬宇;唐碚
• 申請（專利權）人: 湖南鑫利生物科技有限公司;重慶大學
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備迷迭香熊果酸的方法，其特征在于具體的工藝步驟如下：

(1)制備熊果酸濾液

先將體積百分濃度為40～50％，pH為2～4的乙醇水溶液泵入溶解罐中，再加入質量百分含量為10～30％熊果酸的迷迭香脂溶性抗氧化劑提取物，所述質量百分含量10～30％熊果酸的迷迭香脂溶性抗氧化劑提取物質量與體積百分濃度為40～50％乙醇的體積比為1kg∶20～30L。將迷迭香脂溶性抗氧化劑提取物加入完畢后，繼續攪拌溶液15～30min后進行第一次過濾，直至無濾液濾出時止。分別收集第一次濾過液和第一次濾渣。對收集的第一次濾過液，用于制備鼠尾草酸質量百分含量為30～45％的脂溶性抗氧化劑；對收集的第一次濾渣，用體積百分濃度為90～95％乙醇進行溶解，濾渣質量與體積百分濃度為90～95％乙醇的體積比為1kg∶20～30L，在攪拌溶解30～45min后進行第二次過濾，直至無濾液濾出時止。分別收集第二次濾過液和第二次濾渣。對收集的第二次濾過液，即制備出熊果酸濾液，用于下步進行膜過濾分離；對收集的第二次濾渣，回收乙醇后用于制備復合肥料；

(2)制備膜過濾分離液

第(1)步完成后，將第(1)步制得的熊果酸濾液泵入截留分子量為30～50KDa耐有機溶劑膜分離機中，在表壓為0.6～1.6MPa的條件下進行第一次膜分離，直至該膜分離截留液與濾過液的體積為1L∶5～8L時停止膜分離。分別收集第一次膜分離濾過液和第一次膜分離截留液。對收集的第一次膜分離濾過液，與后續膜分離獲得的濾過液合并，用于下步制備熊果酸分離液；對收集的第一次膜分離截留液用體積百分濃度為90～95％乙醇進行稀釋，第一次膜分離截留液與加入的體積百分濃度為90～95％乙醇溶液的體積比為1L∶5～8L。稀釋完成后進行第二次膜分離，第二次膜分離表壓為0.6～1.6MPa，直至其膜分離截留液與濾過液的體積比為1L∶5～8L時停止膜分離。分別收集第二次膜分離濾過液、第二次膜分離截留液和截留分子量為30～50KDa耐有機溶劑的膜，對收集的第二次膜分離截留液，用于制備高純度葉綠素和醇溶性多糖；對收集的第二次膜分離濾過液，與收集的第一次膜分離濾過液進行合并，即制備出膜過濾分離液，用于下步制備熊果酸純化液；對收集的30～50KDa耐有機溶劑的膜，用0.5～1％堿液清洗后再用純凈水清洗至pH值為5～7，再加入體積百分濃度為0.1～0.5％的甲醛溶液密閉保存；

(3)制備熊果酸純化液

取粒徑為35～75μm的MCI GEL CHP 20樹脂，用4～8倍樹脂體(BV)的無水乙醇浸泡4～8小時，去除上層漂浮的樹脂顆粒后，后用4～8倍樹脂體積(BV)pH＝3～5的體積百分濃度為40～60％乙醇水溶液平衡1～4小時，備用；

第(2)步完成后，將第(2)步制備的膜分離濾過液泵入裝有粒徑為35～75μm的活化MCI樹脂的樹脂柱中，控制泵入液的流速2～5倍樹脂體積(BV)/h，MCI樹脂體積與該膜分離濾過液體積比1L∶10～20L。待膜分離濾過液泵入完成后，以1～5BV/h的流速泵入體積百分濃度為70～80％的乙醇水溶液洗脫，分別收集第1～4BV、第5～8BV及第9～12BV的洗脫液。對收集的第1～4BV及第9～12BV洗脫液進行合并，用于回收乙醇；對收集的第5～8BV的洗脫液，即為熊果酸純化液，用于下部制備熊果酸粉末。洗脫出熊果酸的MCI樹脂柱可再次用于制備下批次熊果酸純化液；

(4)制備熊果酸粉末

第(3)步完成后，將第(3)步獲得的熊果酸純化液，泵入旋轉蒸發儀中，在溫度為60～70℃、相對真空度為-0.06MPa～-0.09MPa下減壓蒸餾乙醇，待冷凝器中無冷凝液體流出時，停止蒸餾，分別收集蒸餾冷凝液乙醇和濃縮液。對于收集的濃縮液，轉入結晶罐中，在溫度為20～40℃區間進行結晶12～24小時，然后過濾，分別收集濾液和濾渣，對收集的濾液，泵至下批次(3)制備熊果酸純化液步驟中；對收集的濾渣，送入真空干燥機中，進行進一步干燥，在溫度50～60℃，相對真空度為-0.06～-0.09MPa的條件下干燥5～8h，即制備出熊果酸粉末。該迷迭香脂溶性抗氧化劑中熊果酸質量百分含量為95～98％，其總收得率為迷迭香脂溶性抗氧化劑粗品質量的25～35％；

(5)制備葉綠素和醇溶性多糖洗脫液

取粒徑為75～150μm的MCI GEL CHP 20樹脂，用4～8倍樹脂體(BV)的無水乙醇浸泡4～8小時，去除上層漂浮的樹脂顆粒后，后用4～8倍樹脂體積(BV)pH＝3～5的體積百分濃度為40～60％乙醇水溶液平衡1～4小時，備用；

第(2)步完成后，將第(2)步制備的第二次膜分離截留液泵入裝有粒徑為75～150μm的活化MCI樹脂的樹脂柱中，控制泵入液的流速2～5倍樹脂體積(BV)/h，MCI樹脂體積與該第二次膜分離截留液體積比1L∶10～20L。待膜分離截留液泵入完成后，以1～5BV/h的流速泵入體積百分濃度為85～95％的乙醇水溶液洗脫，分別收集第1～4BV、第6～8BV及9～11BV的洗脫液。對收集的第1～4BV的洗脫液，含醇溶性多糖，即為醇溶性多糖洗脫液，用于下步制備醇溶性多糖粉末；對收集的第6～8BV的洗脫液，含葉綠素，用于下步制備葉綠素粉末；對收集的第9～11BV的洗脫液，用于回收乙醇；

(6)制備葉綠素粉末

第(5)步完成后，將第(5)步獲得的含有葉綠素的洗脫液，泵入旋轉蒸發儀中，在溫度為60～70℃、相對真空度為-0.06MPa～-0.09MPa下減壓蒸餾乙醇，待冷凝器中無冷凝液體流出時，停止蒸餾，分別收集蒸餾冷凝液和蒸餾濃縮液。對于收集的蒸餾濃縮液，轉入真空干燥機中，在溫度50～60℃，相對真空度為-0.06～-0.09MPa的條件下干燥5～8h，即制備出葉綠素粉末。其葉綠素質量百分含量為90～98％，其總收得率為迷迭香脂溶性抗氧化劑粗品質量的12～20％；

(7)制備醇溶性多糖粉末

第(6)步完成后，將第(5)步獲得的含有醇溶性多糖的洗脫液，首先將洗脫液在轉速為1500～4000r/min，離心時間為10～20min。離心完成后，分別收集離心沉淀和離心清液。對收集的離心清液，用于回收乙醇；對收集的離心沉淀，轉入真空干燥機中，在50～60℃，相對真空度為-0.06～-0.09MPa的條件下干燥5～8h，即制備出干燥醇溶性多糖。接著，將獲得的干燥醇溶性多糖用粉碎機進行粉碎并過40～200目的分樣篩，分別收集過40～200目的分樣篩的粉末和未過40～200目的分樣篩的干燥醇溶性多糖，對過40～200目分樣篩的粉末，即制備出醇溶性多糖粉末。對收集的未過40～200目的分樣篩的干燥醇溶性多糖，返回粉碎機中再次粉碎，直至全過40～200目分樣篩時停止。制備的醇溶性多糖粉末中，醇溶性多糖質量百分含量為85～91％，其總收得率為迷迭香脂溶性抗氧化劑粗品質量的25～30％。