[發明專利]轉基因馬鈴薯AM04-1020特異性實時熒光PCR檢測引物、探針、方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202110665903.1
• 申請日: 2021-06-16
• 公開（公告）號: CN114350833A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 劉二龍;盧麗;關麗軍;王毅謙;鄭冠津;魏霜;李志勇
• 申請（專利權）人: 廣州海關技術中心;黃埔海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了AM04?1020轉基因馬鈴薯特異性實時熒光PCR檢測引物、探針、方法和試劑盒。本發明針對AM04?1020轉基因馬鈴薯特異性序列設計引物和探針，建立AM04?1020轉基因馬鈴薯特異性實時熒光PCR檢測方法，具有特異性好、靈敏度高、可重復性良好等優點，擴增效率為94.39％，最低定量檢測下限為0.025％。有效的解決了現有技術中無AM04?1020轉基因馬鈴薯特異性精準定量檢測技術的問題，該方法可應用于進出境口岸檢驗檢疫、國內農業產品食品監管的AM04?1020轉基因馬鈴薯及其產品的檢測。

技術領域

本發明屬于轉基因產品檢測領域，具體涉及轉基因馬鈴薯AM04-1020實時熒光PCR檢測引物探針、方法和試劑盒。

背景技術

目前國外上市的轉基因馬鈴薯約47種(ISSSA數據)，目前國外上市的品系中，僅歐盟建立的EH92-527-1品系品系特異性檢測方法：Savini C.,Foti N.,Mazzara M.,CharlesDelobel C.,Van Den Eede G.；Event-specific Method for the Quantification ofEvent EH92-527-1Potato Using Real-time PCR-Validation Report and Protocol-SAMpling and DNA Extraction of Potato Online Publication(2006)；此外，高宏偉等建立的一種未上市馬鈴薯品系av43-6-g7檢測方法：(Gao H,Yu X,Deng T,et al.Event-specific detection of transgenic potato AV43-6-G7 using real-time and digitalPCR methods[J].Bmc Biotechnology,2016,16(1):74.)。尚未有馬鈴薯其他轉基因品系的品系特異性實時熒光PCR檢測方法的文獻。

支鏈淀粉馬鈴薯AM04-1020是由馬鈴薯品種庫拉斯(Kuras)采用RNA干擾技術研發的降低顆粒結合的淀粉合酶的表達轉基因馬鈴薯品系。AM04-1020馬鈴薯顯著降低了直鏈淀粉的水平，使支鏈淀粉含大于98％；同時其轉入編碼乙酰羥酸合酶的csr1-2基因(咪唑啉酮類除草劑耐受)用作組織培養過程中的篩選基因。

與另一種轉基因馬鈴薯品系EH92-527-1通過反義技術單獨下調粒狀淀粉合酶(BGSS) (WO 92/11376，EP0563 189)而產生支鏈淀粉型淀粉不同，AM04-1020通過基因遺傳工程方法，通過同時RNA干擾下調三個可溶性淀粉合酶基因(granule-bound starchsynthase gene,SS)使直鏈淀粉含量降低生產支鏈淀粉型淀粉，并且AM04-1020轉基因品種的峰值粘度(淀粉的粘度)降至野生型馬鈴薯品種的70％，而EH92-527-1品系與非轉基因馬鈴薯流行品種相比，峰值粘度不變。

目前對轉基因產品多數國家均采用相應的標識管理制度，標識管理制度的建立和實施依賴于有效準確的檢測鑒定技術。針對轉基因馬鈴薯AM04-1020構建特異性實時PCR檢測方法。

目前歐盟等其他國家和地區均尚無轉基因馬鈴薯AM04-1020特異性實時熒光PCR檢測方法。

發明內容：

本發明的目的是提供一種特異性好、靈敏度高、穩定性強，快速準確鑒別轉基因馬鈴薯 AM04-1020特異性實時熒光PCR檢測引物、探針、方法和試劑盒。

本發明的第一個目的是提供一種轉基因馬鈴薯AM04-1020特異性實時熒光PCR檢測引物組，包括檢測引物和檢測探針：

所述的檢測引物如下所示：

AM04-1020-5F2：5’-ATTTTTCATCCACATTTAAATTTATTAG-3’(如SEQ ID NO.1所示)；