[發(fā)明專利]一種調(diào)控APP表達(dá)的靶標(biāo)位點序列及其在防治AD上的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110665344.4
• 申請日: 2021-06-16
• 公開（公告）號: CN113373148B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙寶全;張芳;李行舟;山花;良良;蒲韻竹;王永安;馮元州;孫曼霽
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A01K67/027;A61K49/00;A61K31/7105;A61P25/28
• 代理公司: 北京專贏專利代理有限公司 11797
• 代理人: 劉備

本發(fā)明涉及一種調(diào)控APP表達(dá)的靶標(biāo)位點序列及其在防治AD上的應(yīng)用，該靶標(biāo)位點序列為環(huán)狀RNA分子circRNA642，其人源核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述circRNA642的斑馬魚源核苷酸序列為SEQ ID NO:2所示，本發(fā)明還提供了一種APPsw轉(zhuǎn)基因斑馬魚癡呆模型。本發(fā)明提供的circRNA642靶標(biāo)位點序列可用于調(diào)控APP表達(dá)和防治阿爾茨海默病；本發(fā)明提供的APPsw轉(zhuǎn)基因斑馬魚癡呆模型可用于評價藥物調(diào)控APP表達(dá)效果和評價藥物防治阿爾茨海默病的效果。本發(fā)明提供的調(diào)控APP表達(dá)的靶標(biāo)位點序列是通過本發(fā)明人團隊建立的斑馬魚癡呆模型通過高通量測序發(fā)現(xiàn)的，通過細(xì)胞實驗驗證該靶標(biāo)位點序列確實與APP表達(dá)有相關(guān)性，說明他們之間具有調(diào)控關(guān)系，是將來防治癡呆的新的靶點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種調(diào)控APP表達(dá)的靶標(biāo)位點序列及其在防治AD上的應(yīng)用。

背景技術(shù)

阿爾茨海默病(AD)患者腦內(nèi)大量的神經(jīng)元外大量Aβ沉積及神經(jīng)元內(nèi)纖維蛋白纏結(jié)是AD最典型的病理改變。淀粉樣蛋白肽(Aβ)是阿爾茨海默病(AD)(早老性癡呆)中淀粉樣蛋白斑塊的主要成分，淀粉樣前體蛋白(APP)是Aβ的唯一來源。淀粉樣蛋白假說在AD中的相關(guān)性，高Aβ水平的毒性作用已被廣泛研究。環(huán)形RNA(circRNA)是近年來發(fā)現(xiàn)的在DNA轉(zhuǎn)錄過程中產(chǎn)生的，它和翻譯成蛋白質(zhì)的mRNA有對應(yīng)關(guān)系，環(huán)形RNA能夠吸附和它對應(yīng)的miRNA，miRNA被環(huán)形RNA吸附后,miRNA解除了對相應(yīng)的mRNA表達(dá)蛋白質(zhì)的抑制，起到了促進該蛋白表達(dá)的作用。

Aβ級聯(lián)學(xué)說提出，Aβ沉積是AD發(fā)生的始動因素。大量Aβ沉積促使tau蛋白過度磷酸化，造成神經(jīng)元死亡,最終導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙，而Aβ則來源于APP。APP是β淀粉樣蛋白(β-amyloid，Aβ)的前體蛋白，屬I型跨膜糖蛋白，有細(xì)胞表面受體的結(jié)構(gòu)特征。APP基因位于21號染色體長臂，APP基因轉(zhuǎn)錄后經(jīng)不同剪接方式得到編碼695-770個氨基酸多肽的mRNA。其中APP695、APP714、APP751和APP770的編碼含Aβ肽，主要位于C-末端。APP基因含有19個外顯子，7、8、15外顯子為選擇剪切位點，通過選擇性剪切成不同的APP跨膜糖蛋白，APP695、APP751和APP770為主要形式，一般在神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，由長的胞外區(qū)、跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)和短的胞漿區(qū)三個部分組成。神經(jīng)元中以APP695(含有695個氨基酸殘基)最常見。APP的代謝有兩種途徑，一種是正常情況下人體APP主要被α分泌酶代謝生成可溶性sAPPα和羧基末端片段C83，C83再由γ分泌酶降解。也有少量APP進入β分泌酶代謝途徑，但是在病理條件下，進入β分泌酶代謝途徑的APP量增加，促使被β分泌酶切割產(chǎn)生C99，之后經(jīng)γ分泌酶順序性錯誤酶切生成具有神經(jīng)毒性的Aβ。APP裂解釋放出的Aβ主要是含40個氨基酸殘基的Aβ1-40，同時也釋出少量的含42個氨基酸殘基的Aβ1-42，Aβ1-42更易聚集，是淀粉樣斑塊的主要成分。APP基因突變會導(dǎo)致常染色體顯性遺傳的家族性AD發(fā)生。APP基因已知至少有6種點突變，目前研究較多的APP突變有APP瑞典型突變(Switch突變)(APPsw)和APP倫敦型突變(London突變)(APPlon)。APPsw主要是APP695第595和596位氨基酸由賴氨酸和甲硫氨酸變?yōu)樘於０泛土涟彼?，突變型APP基因產(chǎn)物可能更容易導(dǎo)致APP裂解代謝進入β分泌酶途徑，從而導(dǎo)致Aβ的大量產(chǎn)生，或生成更多的易聚集的Aβ1-42，最終形成大量的老年斑。已經(jīng)有足夠的證據(jù)顯示AD患者及動物模型的腦內(nèi)出現(xiàn)APP的高表達(dá)現(xiàn)象，因此，調(diào)控APP的高表達(dá)將是治療AD最有前景的治療方法。